[發(fā)明專利]一種黃牛chemerin基因的單核苷酸多態(tài)性檢測方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010255639.6
• 申請日: 2010-08-18
• 公開（公告）號: CN101921854A
• 公開（公告）日: 2010-12-22
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 陳宏;張亞;朱金龍;徐瑤;藍(lán)賢勇;雷初朝
• 申請（專利權(quán)）人: 西北農(nóng)林科技大學(xué)
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種黃牛chemerin基因的單核苷酸多態(tài)性的檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

以包含黃牛chemerin基因的待測黃牛全基因組DNA為模板，以引物對P為引物，PCR擴(kuò)增黃牛chemerin基因；

所述的引物對P為：

正向引物：5’-CGGAGCCCACCAGACAGG-3’18bp；

反向引物：5’-CAGCGGGCAGCAGCACAC-3’18bp；

將PCR產(chǎn)物送測序，根據(jù)測序結(jié)果及突變情況，在第1021位之后重新設(shè)計下游引物，并人為引入PvuII酶切位點，以引物對newP為引物，PCR擴(kuò)增黃牛chemerin基因；

所述的引物對newP為：

上游引物：5’-CGGAGCCCACCAGACAGG-3’?????????18bp；

下游引物：5’-ctctgggctggcgctcaccgtgtcAgc-3’27bp；

用PvuII限制性內(nèi)切酶消化PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，再對酶切后的片段進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，根據(jù)瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果同時鑒定黃牛的chemerin基因第868位和第1021位的堿基多態(tài)性。

2.如權(quán)利要求1所述的黃牛chemerin基因的單核苷酸多態(tài)性的檢測方法，其特征在于，所述的PCR擴(kuò)增的反應(yīng)程序為：95℃預(yù)變性5min；35個循環(huán)的94℃變性30s，64℃退火30s，72℃延伸30s；72℃延伸10min。

3.如權(quán)利要求1所述的黃牛chemerin基因的單核苷酸多態(tài)性的檢測方法，其特征在于，所述的瓊脂糖凝膠的質(zhì)量濃度為3.0％。

4.如權(quán)利要求1所述的黃牛chemerin基因的單核苷酸多態(tài)性的檢測方法，其特征在于，用一種PvuII限制性內(nèi)切酶同時識別第868位和第1021位所在的PvuII酶切位點。

5.如權(quán)利要求1所述的黃牛chemerin基因的單核苷酸多態(tài)性的檢測方法，其特征在于，所述的根據(jù)瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果及不同帶型的PCR產(chǎn)物測序結(jié)果，鑒定黃牛chemerin基因第868位和第1021位的堿基多態(tài)性存在三種單倍型：A(G-G)，B(G-A)和C(A-G)；這三種單倍型構(gòu)成六種基因型AA(G-G，G-G)，BB(G-A，G-A)，CC(A-G，A-G)，AB(G-G，G-A)，AC(G-G，A-G)，和BC(G-A，A-G)。