[發明專利]一種堅強芽孢桿菌菌株及其應用

有效

• 申請號: 201010254913.8
• 申請日: 2010-08-17
• 公開（公告）號: CN101993843A
• 公開（公告）日: 2011-03-30
• 發明（設計）人: 宋曉玲;楊冰;黃倢;劉莉
• 申請（專利權）人: 中國水產科學研究院黃海水產研究所
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A23K1/16;C12R1/07
• 代理公司: 青島海昊知識產權事務所有限公司 37201
• 代理人: 張中南

技術領域

本發明屬于益生菌領域，具體涉及一種堅強芽孢桿菌菌株及其應用。

背景技術

抗生素的發現促進了人類醫學的巨大進步，抗生素也是動物養殖業尤其是水產養殖業抗菌治病的首選藥物。但隨著高密度、集約化、規模化、工廠化養殖模式的迅速發展，病害大量傳播、抗生素肆意濫用、養殖環境惡化、病原耐藥性增強、養殖動物藥物殘留等問題也日益為人們所關注。開拓和發展符合環境友好和可持續發展戰略的病害防治技術和產品已經成為水產養殖業的迫切需求。

拮抗是微生物之間普遍存在的自然現象。在同一生態位中微生物通過營養競爭、空間競爭或分泌抗生素、細菌素等毒素抑制其他微生物的生長。微生物控制技術便是應用這一原理，將具有拮抗特性的益生菌添加到飼料中或直接施入養殖水體，殺死或抑制病原微生物，可為養殖動物營造良好的生存環境。益生菌作為抗生素的替代品，對養殖產品無毒副作用、無殘留和抗藥性，提高了水產動物生產性能和健康水平，保證水產品質量及促進水產養殖業的可持續發展，能夠獲得較好的社會效益和經濟效益。

目前雖然許多商品益生菌制劑也用于水產養殖，但其菌株多來源于陸生環境或動物，并不適合在水產動物消化道和養殖水體中增殖，因此在篩選益生菌應著重考慮養殖水體和動物消化道中的土著菌。芽孢桿菌(Bacillus?sp.)屬于芽孢桿菌科，廣泛分布于海水養殖內外環境中，芽孢桿菌屬細菌對水產動物極少有致病性，是較好的益生菌候選菌株。芽孢桿菌具有較強的腸道粘附能力，不僅能降低腸道內NH₃濃度、促進淀粉和纖維素的分解，還能產生抗菌肽、提高宿主動物的免疫活性。此外，芽孢桿菌能夠生存于高溫和干燥等惡劣環境，是一種耐酸、耐鹽、耐高溫和耐擠壓的高穩定性細菌。目前應用較多的有枯草芽孢桿菌(B.subtilis)、地衣芽孢桿菌(B.lincheniformis)、蠟樣芽孢桿菌(B.cereus)、堅強芽孢桿菌(B.firmus)等。

發明內容

本發明的目的是提供一種堅強芽孢桿菌菌株及其應用，即來源于對蝦消化道的一種內源性的堅強芽孢桿菌菌株，該菌株可用于增強對蝦細胞和體液的免疫水平，特別是提高對蝦抗病毒感染能力。

本發明所涉及的菌株信息如下：

堅強芽孢桿菌(Bacillus?firmus)SSL065菌株分離自健康中國對蝦消化道，經高劑量注射或投喂實驗確定對中國對蝦(Penaeus?chinensis)、凡納濱對蝦(Litopenaeus?vannamei)、日本對蝦(Penaeus?japonicus)等安全，無病原性。菌株于2010年7月30日在武漢的中國典型培養物保藏中心保藏，保藏編號為：CCTCC?M?2010192。

堅強芽孢桿菌SSL065菌株的形態特征：

菌落特征：在普通營養平板上菌落近圓形，較平坦，呈淡灰黃色、半透明、表面較濕潤、較光滑、邊緣裂片狀。TCBS培養基上可生長，菌落呈綠色，在副溶血弧菌檢測培養基上不生長。

細胞特征：革蘭氏染色陽性，桿狀，兩端稍鈍圓，無莢膜，大小為0.6-0.7μm×0.8-1.0μm，周生鞭毛。

芽孢特征：卵圓形，近中生，孢囊不膨大。

堅強芽孢桿菌SSL065菌株的生理生化特征：

堅強芽孢桿菌SSL065菌株的β-半乳糖苷酶反應ONPG陰性，精氨酸雙水解酶反應ADH陰性，賴氨酸脫羧酶反應LDC陰性，鳥氨酸脫羧反應ODC陰性，檸檬酸利用CIT陰性，H₂S產生H₂S陰性，脲酶反應URE陰性，色氨酸脫氨酶反應TDA陰性，吲哚產生IND陰性，3-羥基丁酮產生乙酰甲基甲醇反應VP陽性，明膠酶反應GEL陽性，葡萄糖反應GLU陰性，甘露醇反應MAN陰性，肌醇反應INO陰性，山梨醇反應SOR陰性，鼠李糖反應RHA陰性，蔗糖反應SAC陰性，蜜二糖反應MEL陰性，苦杏仁苷反應AMY陰性，阿拉伯糖反應ARA陰性，N₂O產生陰性，還原到N陰性。氧化酶實驗陰性，過氧化氫酶實驗陽性。三糖鐵瓊脂實驗無顏色變化，不產生H₂S。

堅強芽孢桿菌SSL065菌株的16rDNA堿基序列如SEQ?ID?NO：1所示。

堅強芽孢桿菌SSL065菌株可用于制備堅強芽孢桿菌SSL065菌粉：