[發明專利]一種溫敏凝膠引導組織再生屏障膜及其制備方法

無效

• 申請號: 201010254791.2
• 申請日: 2010-08-17
• 公開（公告）號: CN101927036A
• 公開（公告）日: 2010-12-29
• 發明（設計）人: 徐欣;崔軍;孫康寧;梁杰
• 申請（專利權）人: 山東大學
• 主分類號: A61L31/12
• 分類號: A61L31/12;A61L31/04;A61L31/00
• 代理公司: 濟南圣達專利商標事務所有限公司 37221
• 代理人: 楊琪

技術領域

本發明涉及一種溫敏凝膠引導組織再生屏障膜及其制備方法，屬于生物醫學領域。

背景技術

引導組織再生技術的原理是使用屏障膜隔離周圍軟組織的長入，隔離周圍組織的長入，為牙周組織和骨組織的再生提供空間。屏障膜的性能在一定程度上決定了引導組織再生技術的成敗。目前，可吸收性生物膜由于具有生物相容性好，無須二次手術取出等優點，在牙周組織再生和骨缺損的修復中已得到廣泛應用。但目前國內外的膜產品存在生產工藝復雜、價格高、不具有骨誘導作用等缺陷。

殼聚糖是甲殼素脫乙酰基的衍生物，具有良好的生物相容性、可降解活性以及促進組織再生活性。以殼聚糖為基材的溫敏凝膠系統可以在低溫或常溫下保持液體狀態，當溫度升高后發生相轉變。由于其相轉變條件溫和、具有良好的生物相容性等優點，近年來受到廣泛關注，已被應用于組織工程、藥物載體等領域。當凝膠形成后，由于疏水作用、氫鍵及共價鍵等靜電作用，使之具有多孔的網狀支架形態，并具有一定的機械強度和空間保持能力。因此，利用殼聚糖制備可吸收性生物膜具有廣闊的應用前景。

目前，現有技術中，并沒有關于利用殼聚糖溫敏凝膠制備引導組織再生膜的相關報道。

發明內容

針對上述現有技術，本發明提供了一種溫敏凝膠引導組織再生屏障膜，其生物相容性好，可應用于引導組織再生或引導骨再生領域，本發明還提供了其制備方法。

本發明是通過以下技術方案實現的：

一種溫敏凝膠引導的組織再生屏障膜的制備方法，步驟如下：

(1)將殼聚糖溶解在濃度能保證殼聚糖充分溶解且溶解后所得溶液pH大于5.0的乙酸溶液中，制得殼聚糖濃度為0.02g/ml的殼聚糖酸溶液，滅菌，于冰浴中放置至少15分鐘(防止凝結)，備用；

(2)將β-甘油磷酸鈉溶于去離子水，制得濃度為0.35～0.85g/ml的β-甘油磷酸鈉溶液，過濾除菌，于冰浴中放置至少15分鐘(防止凝結)，備用；

(3)在不斷攪拌、冰浴條件下，將殼聚糖酸溶液與β-甘油磷酸鈉溶液混合，其中，殼聚糖與β-甘油磷酸鈉的質量比為2∶(3.5～8.5)，混合后繼續攪拌8～12分鐘，得到澄清、均質的殼聚糖/β-甘油磷酸鈉溶液，靜置1.5～2.5小時，脫泡；

(4)將殼聚糖/β-甘油磷酸鈉溶液注入平底容器中，37℃干燥成膜，即得。

所述步驟(1)中，滅菌為：121℃高壓蒸汽滅菌10分鐘。

所述步驟(2)中，過濾除菌是用0.22μm濾器過濾除菌。

上述制備方法制備的引導組織再生膜，具有多孔結構和良好的生物相容性，其有效成分組成包括殼聚糖和β-甘油磷酸鈉，其中，殼聚糖的重量百分比為19.0～36.4％，β-甘油磷酸鈉的重量百分比為63.6～81.0％；屏障膜具有多孔的表面和內部結構(可根據β-甘油磷酸鈉的重量百分比調節孔徑大小)；具有一定的抗拉強度；具有生物降解性能；具有良好的生物相容性。

使用時，將屏障膜植入體內，起到隔離周圍軟組織的長入、隔離周圍組織的長入的功能，為牙周組織和骨組織的再生提供空間。

另外，也可以將步驟(3)制備得到的殼聚糖/β-甘油磷酸鈉溶液直接注入體內，在人體體溫下，自然成膜。

本發明是利用殼聚糖溶液中加入弱堿性的β-甘油磷酸鈉具有溫度相轉變的特性，在37℃完成脫水后，形成透明略帶黃色的生物膜，具有多孔的結構，并表現出了一定的硬度和韌性。

本發明的引導組織再生膜其合成方法簡單，成膜條件溫和，具有良好的細胞生物相容性，符合生物體內應用的要求，作為一種新型生物膜具有良好的應用前景。

附圖說明

圖1為紅外光譜分析曲線圖，其中，曲線a：殼聚糖；曲線b：β-甘油磷酸鈉；曲線c：殼聚糖+5％β-甘油磷酸鈉(A膜)；曲線d：殼聚糖+10％β-甘油磷酸鈉(B膜)。

圖2為L929細胞形態示意圖，其中，a：處于對數生長期；b：經過胰酶消化后接種；(倒置相差顯微鏡×10)。

圖3為實施例1所制備得到的組織再生膜的形態圖，其中，a：正面圖；b：側面圖。

圖4為實施例1所制備得到的組織再生膜在電鏡下的形貌圖，其中，a：殼聚糖+5％β-甘油磷酸鈉所制備的屏障膜表面形貌；b：殼聚糖+10％β-甘油磷酸鈉所制備的屏障膜表面形貌。

具體實施方式

下面結合實驗和實施例對本發明作進一步的說明。

實驗

1.材料與方法

1.1實驗材料

1.1.1實驗用細胞株