[發明專利]魔芋神經酰胺標樣的制備方法

無效

• 申請號: 201010254147.5
• 申請日: 2010-08-16
• 公開（公告）號: CN101914119A
• 公開（公告）日: 2010-12-15
• 發明（設計）人: 侯雪;李獻
• 申請（專利權）人: 成都希福食品有限公司
• 主分類號: C07H15/10
• 分類號: C07H15/10;C07H1/08
• 代理公司: 四川省成都市天策商標專利事務所 51213
• 代理人: 馬林中

技術領域

本發明涉及一種標樣的制備方法，具體涉及一種魔芋神經酰胺標樣的制備方法。

背景技術

神經酰胺是細胞膜的組成部分，具有以下生物功能：1、神經酰胺與糖甙結合形成神經鞘苷，存在于動、植物等真核細胞的細胞膜，參與細胞功能；2.調節細胞生長變異的作用；3.誘導細胞凋亡；4.調節蛋白分泌；5.在炎癥中的作用；6.具有良好的保水作用等。神經酰胺類物質，是一類大分子的化合物，分子結構復雜，如果沒有標準樣品，就無法檢測出含量，也就無法證明提取物中有無神經酰胺，提取工藝是否有效。神經酰胺的含量檢測，雖然有動物神經酰胺的檢測方法，標樣易買，但對于植物神經酰胺卻是另一碼事，標樣難買，尤其是魔芋神經酰胺不僅買不到標樣，同時有關其結構、分子量等完全空白一片。

發明人對從魔芋中提取神經酰胺的方法進行了長期大量的研究，目前已經完成了從魔芋中提取神經酰胺的工藝研究，并在中國申請了專利，專利申請號為CN200910263528.7。本發明是在此基礎上，對魔芋神經酰胺進行的進一步研究，以上述專利申請中公開的方法制備的魔芋神經酰胺為基礎，通過純化和結構鑒定，制備出魔芋神經酰胺的標樣，為本領域對魔芋神經酰胺的進一步利用提供了研究基礎。

發明內容

本發明提供了一種魔芋神經酰胺標樣的制備方法，通過以下步驟實現：

步驟(1)、采用RP-C₁₈硅膠柱層析制備標樣：通過濕法裝柱，濕法上樣，依據所分離物質的極性差異，采用RP-C₁₈硅膠柱使雜質與神經酰胺得到有效分離。

步驟(2)、收集洗脫液為水-甲醇從2∶8體積比至水-甲醇5∶5體積比時所流出的組分：RP-C₁₈硅膠柱層析采用梯度洗脫，洗脫液為水-甲醇按不同比例配制。

更進一步的技術方案是步驟(1)所述RP-C₁₈硅膠柱層析，洗脫液流速為1.0ml/min，每5ml收集一次。

更進一步的技術方案是步驟(2)所述RP-C₁₈硅膠柱層析洗脫液梯度變化為：水-甲醇是1∶9-8∶2體積比。

更進一步的技術方案是步驟(2)所述RP-C₁₈硅膠柱層析制備時，于水-甲醇從2∶8體積比至水-甲醇5∶5體積比時收集得到魔芋神經酰胺四個標樣。

本發明提供了魔芋神經酰胺標樣的制備方法，將魔芋神經酰胺進行純化和結構分析鑒定，制備了魔芋神經酰胺的標樣，為對魔芋神經酰胺的進一步利用打下了良好的基礎，具有很實際的經濟效益和社會效益。

具體實施方式

一種魔芋神經酰胺標樣的制備方法，是將純化后的魔芋神經酰胺組分Ⅱ進行RP-C₁₈硅膠柱層析分離，水-甲醇梯度洗脫，洗脫液流速為1.0ml/min，每5ml收集一次。水-甲醇從2∶8體積比至水-甲醇5∶5體積比處收集得化合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ。

化合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ均為白色無定型粉末狀固體。分別對化合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ進行結構解析，得到如下結論：化合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ的ESI-MS分別顯示m/z?736.80，746.72，792.81，820.70，其¹HNMR?¹³CNMR?HMBC?¹H-¹H?COSY譜圖表明化合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ為如下結構：

其中，化合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ對應的n值分別為11、13、15、19。

四種化合物對應的魔芋神經酰胺標準物質的名稱分別為：

1-O-β-D-吡喃葡萄糖-(2S，3R，4E，8Z)-2-N-[(2‘R)-2-羥基-十六碳酰氨胺]-4，8十八碳二烯；

1-O-β-D-吡喃葡萄糖-(2S，3R，4E，8Z)-2-N-[(2‘R)-2-羥基-十八碳酰氨胺]-4，8十八碳二烯；

1-O-β-D-吡喃葡萄糖-(2S，3R，4E，8Z)-2-N-[(2‘R)-2-羥基-二十碳酰氨胺]-4，8十八碳二烯；

1-O-β-D-吡喃葡萄糖-(2S，3R，4E，8Z)-2-N-[(2‘R)-2-羥基-二十二碳酰氨胺]碳酰氨胺]-4，8十八碳二烯。