[發明專利]用于快速檢測沙丁胺醇的電化學免疫傳感器的制備方法

無效

• 申請號: 201010252374.4
• 申請日: 2010-08-13
• 公開（公告）號: CN101915792A
• 公開（公告）日: 2010-12-15
• 發明（設計）人: 王正武;米芹
• 申請（專利權）人: 上海交通大學
• 主分類號: G01N27/26
• 分類號: G01N27/26;G01N27/38;G01N27/48;G01N33/53
• 代理公司: 上海交達專利事務所 31201
• 代理人: 王錫麟;王桂忠

技術領域

本發明涉及的是一種化學檢測技術領域的方法，具體是一種用于快速檢測沙丁胺醇的電化學免疫傳感器的制備方法。

背景技術

沙丁胺醇屬于β-受體興奮劑，能使動物體內的營養成分由脂肪向肌肉轉移，表現出營養再分配效應，進而調控動物體的物質代謝，增強脂肪分解，促進蛋白質合成，顯著提高胴體瘦肉率和飼料報酬。但是，人類食用了殘留有沙丁胺醇的動物食品后，會出現不同程度的中毒現象，它們的濫用及在動物性食品中的殘留嚴重危害著人們的健康和生命安全，并嚴重影響了我國畜禽產品的出口貿易。所以我國和歐盟以及世界上大多數國家都明文禁止沙丁胺醇用作飼料添加劑。

目前關于檢測沙丁胺醇殘留的方法主要有色譜法、色譜質譜聯用、免疫分析法、微生物法等，但上述方法存在檢測成本高、操作過程繁瑣、檢測耗時長、不適用現場大通量篩檢等缺點。本發明通過將碳納米管/納米金復合納米材料通過聚硫堇化學組裝于玻碳電極表面，以此傳感界面固定沙丁胺醇抗體，利用電化學傳感器檢測和免疫學技術的高特異性和高靈敏度，發展一種用于檢測沙丁胺醇的納米電化學免疫傳感器，可快速檢測食品和環境中的沙丁胺醇殘留。

碳納米管是一種具有一維納米管狀結構的新型納米材料，它獨特的電子特性和表面微結構，能很好地促進生物電活性分子的電子傳遞，并易于固定生物大分子并能保持其活性。納米金顆粒具有比表面積大、生物親和性高等優點，并具有導電作用和加快蛋白質與電極之間的直接電子轉移，適合于構建無需電子媒介物質的直接電化學生物傳感器。目前，碳納米管和納米金作為電活性材料及載體已被廣泛應用于電化學和生物傳感器中，但鮮有碳納米管和納米金復合物用于電化學免疫傳感器。

發明內容

本發明針對現有技術存在的上述不足，提供一種用于快速檢測沙丁胺醇的電化學免疫傳感器的制備方法，制備得到靈敏度高，穩定性好，現場快速檢測沙丁胺醇的電化學免疫傳感器。

本發明是通過以下技術方案實現的：本發明通過用碳納米管-聚硫堇-納米金依次修飾玻碳電極，再通過自組裝方法得到電化學免疫傳感器。

所述的玻碳電極經過清洗酸洗處理；

所述的清洗酸洗處理是指：將玻碳電極在麂皮上用AL₂O₃粉拋光至鏡面，用蒸餾水沖洗，再用超聲波清洗10分鐘～30分鐘；將清洗后的玻碳電極依次放入體積比為1∶1的硝酸、丙酮溶液中各浸泡3分鐘～15分鐘，然后用蒸餾水沖洗電極；將電極在紅外燈下烘干。

所述的納米金膠溶液的制備方法為：量取氯金酸溶液放在燒瓶中，在微波合成儀內加熱至沸騰，加入一定量新鮮配制的1％檸檬酸三鈉水溶液，強烈攪拌并保持微沸狀態，觀察溶液顏色由無色到深紫色，再到紫紅色，約5min后斷開電源、自然冷卻。配制好的溶膠置于冰箱內在4℃保存(所得膠體金呈深紅色，電子顯微鏡下觀察平均直徑約20nm)。

所述的氯金酸溶液取量為50mL，濃度為0.01％。

所述的微波合成儀使用條件為400W，100℃。

所述的1％檸檬酸三鈉水溶液取量為3mL。

所述的碳納米管懸液的制備方法為：取5mg?MWCNTs-COOH加入5mL二次蒸餾水中混合超聲振蕩20min至黑色均勻溶液。

所述的用碳納米管-聚硫堇-納米金依次修飾玻碳電極是指：

首先用微量取樣器移取MWCNTs-COOH分散液均勻滴加到玻碳電極表面，紅外燈下烘干，制成碳納米管修飾玻碳電極；

然后將碳納米管修飾玻碳電極浸入到含4mmol/L硫堇的4.4mol/L乙酸溶液中，于-0.4～1.4V區間以100mV/s的掃描速度，以循環伏安法掃描30～35圈，電聚合硫堇于碳納米管-玻碳電極表面，取出后用二次蒸餾水小心沖洗，紅外燈下烘干，制成碳納米管-聚硫堇修飾玻碳電極；

最后將碳納米管-聚硫堇修飾玻碳電極浸入到納米金膠體溶液中，2h后取出，二次蒸餾水小心沖洗，空氣中自然干燥，制成碳納米管-聚硫堇-納米金修飾玻碳電極。

所述的自組裝方法是指：將修飾過的玻碳電極在含有沙丁胺醇單克隆抗體的PBS(磷酸鹽緩沖液)溶液中進行自組裝，得到穩定性高的固定沙丁胺醇抗體的免疫電化學傳感器，具體是：將步驟三中制備的碳納米管-聚硫堇-納米金修飾玻碳電極在4℃下，浸入含有沙丁胺醇單克隆抗體的PBS(磷酸鹽緩沖液)溶液中進行自組裝，12h后取出，4℃自然干燥；再滴涂1％的BSA溶液，4℃自然干燥，得到穩定性高的固定沙丁胺醇抗體的免疫電化學傳感器，儲存于4℃冰箱。