[發明專利]5’-鳥苷酸的生產方法

在審

• 申請號: 201010250541.1
• 申請日: 2010-08-10
• 公開（公告）號: CN101993904A
• 公開（公告）日: 2011-03-30
• 發明（設計）人: 深田寬朗;淺原貴之;橋口賢一
• 申請（專利權）人: 味之素株式會社
• 主分類號: C12P19/32
• 分類號: C12P19/32;C12N1/21;C12N15/52;C12R1/01;C12R1/07;C12R1/15;C12R1/185;C12R1/19
• 代理公司: 北京市柳沈律師事務所 11105
• 代理人: 封新琴

技術領域

本發明涉及5’-鳥苷酸的生產方法以及在5’-鳥苷酸的生產中使用的新微生物。5’-鳥苷酸作為調味料、醫藥以及調味料、醫藥的原料是有用的。

背景技術

作為5’-鳥苷酸(鳥苷-5’-一磷酸，以下也稱“GMP”)的工業制備方法，采用發酵法生產鳥苷，再采用酶法將所得的鳥苷磷酸化，從而得到5’-鳥苷酸的方法(專利文獻1～4)。

此外，還已知下述生產方法：將增大了GMP合成酶活性的屬于埃希氏菌屬的微生物與下述產氨短桿菌在包含XMP和氨氣或谷氨酰胺的培養基中進行培養，高效率地將XMP轉化為GMP，并使培養液中生成并蓄積GMP，其中，所述產氨短桿菌的腺苷-三磷酸(ATP)生物合成(以下也稱“ATP再生”)活性高，所述腺苷-三磷酸(ATP)是代謝葡萄糖來從5’-黃苷酸(XMP)合成GMP的反應所必需的(非專利文獻1)。

另一方面，提出了利用發酵法來生產GMP的方法。例如，專利文獻5中公開了一種GMP的生產方法，該生產方法中培養具有腺嘌呤營養缺陷性、顯示德夸菌素(decoyinine)或甲硫氨酸亞砜抗性、且具有GMP生產能力的芽孢桿菌屬的突變株，并收集培養基中生成蓄積的GMP。此外，專利文獻6公開了一種GMP的生產方法，該生產方法中培養使具有肌苷酸(肌苷酸-5’-一磷酸，以下也稱“IMP”)生產能力的埃希氏菌屬細菌的2種5’-核苷酸酶基因缺失、以及IMP脫氫酶和GMP合成酶基因增強而得到的菌株，并收集培養基中生成并蓄積的GMP。但是，一般而言，GMP的直接發酵收率不充分，與前述酶法相比較未必實用。

如前述，針對5′-鳥苷酸的生產進行了各種研究，并已有數個成功的實例。但是，對于核苷酸分解酶還有許多不明之處，已經發現了數種核苷酸分解酶，已知通過使它們缺失能夠提高收率(專利文獻6、7)，但完全抑制其分解是困難的，這是一個大問題。

現有技術文獻

專利文獻

專利文獻1特開平07-231793號公報

專利文獻2特開平10-201481號公報

專利文獻3國際公開第96/37603號小冊子

專利文獻4特開2001-245676號公報

專利文獻5特公昭56-12438號公報

專利文獻6特開2002-355087號公報

專利文獻7國際公開第2006/078132號小冊子

非專利文獻

非專利文獻1?Tatsuro?Fujio等，Biosci.Biotech.Biochem.，1997年，第61卷，5號，840-845頁

發明內容

發明所要解決的問題

本發明的課題是創造新微生物，所述新微生物能夠在使用微生物從XMP生產GMP的方法中使用、且能夠高效率地將XMP轉化為GMP。

解決問題的方法

本發明人等為解決上述問題進行了深入研究，結果發現：通過利用經過修飾從而使得nagD基因無法正常發揮功能、且經過修飾從而增大了GMP合成酶活性的埃希氏菌屬微生物，能夠高效率地將XMP轉化為GMP，從而完成了本發明。

本發明的一類實施方式提供5’-鳥苷酸的生產方法，該方法中使黃苷酸作用于經過修飾從而使得nagD基因無法正常發揮功能、且還經過修飾從而增大了5’-鳥苷酸合成酶的活性的、具有將黃苷酸轉化為5’-鳥苷酸的能力的微生物，來生成5’-鳥苷酸，并收集5’-鳥苷酸。

本發明的其它實施方式提供前述方法，其中，所述微生物經過修飾從而使得nagD基因無法正常發揮功能、而且還經過修飾而增加了guaA基因的表達，從而增大了5’-鳥苷酸合成酶的活性。

本發明的其它實施方式提供前述方法，其中，所述guaA基因編碼下述(A)或(B)的蛋白質。

(A)具有SEQ?ID?NO：2所述的氨基酸序列的蛋白質。

(B)下述蛋白質，所述蛋白質具有在SEQ?ID?NO：2所述的氨基酸序列中包含1個或數個氨基酸殘基的取代、缺失、插入、添加或倒位的氨基酸序列，且具有5’-鳥苷酸合成酶活性。

本發明的其它實施方式提供前述方法，其中，所述微生物還經過修飾從而使得ushA基因和aphA基因中的1種或1種以上的基因無法正常發揮功能。

本發明的其它實施方式提供前述方法，其中，所述微生物是屬于腸桿菌科的細菌、芽孢桿菌屬細菌或棒狀桿菌型細菌。

本發明的其它實施方式提供前述方法，其中，所述微生物是埃希氏菌屬細菌。

本發明的其它實施方式提供前述方法，其中，所述微生物是大腸桿菌。