[發(fā)明專利]歐芹素乙在制備防治肝炎或肝損傷藥物中的應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201010247755.3
• 申請(qǐng)日: 2010-08-06
• 公開（公告）號(hào): CN101904839A
• 公開（公告）日: 2010-12-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張黎;劉厚佳;芮耀誠(chéng);辛海量;李鐵軍;馬建麗;霍炎;王曉黎;高申;王卓;衛(wèi)立辛;王晶;趙娜萍;潘勇華
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)人民解放軍第二軍醫(yī)大學(xué)
• 主分類號(hào): A61K31/37
• 分類號(hào): A61K31/37;A61P31/20;A61P1/16
• 代理公司: 上海德昭知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31204
• 代理人: 丁振英

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，是香豆素類化合物歐芹素乙用于制備防治病毒性肝炎以及抗免疫性或抗化學(xué)性肝損傷藥物的新用途。

背景技術(shù)

香豆素類化合物是順式鄰羥基桂皮酸脫水形成的內(nèi)酯類化合物，此類化合物在傘形科、蕓香科、菊科、豆科、茄科植物中分布廣泛，如蛇床子、獨(dú)活、白芷、前胡、秦皮、茵陳、補(bǔ)骨脂、續(xù)隨子等中藥均含有此類成分[羅雄明，漆淑華，尹浩，李敏一，高程海，張偲。直線型呋喃香豆素類化合物及其藥理活性的研究進(jìn)展。天然產(chǎn)物研究與開發(fā)。2009；21(B05)：230-235]。歐芹素乙是香豆素類化合物中的一種，又名歐前胡素，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下：

香豆素類化合物歐芹素乙制備工藝簡(jiǎn)便，可以從植物中提取獲得，也可采用香豆素類化合物前體進(jìn)行半合成的方法獲得。[1.中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥典委員會(huì)。中華人民共和國(guó)藥典一部。2010：97-98；2.《中草藥》，1986，17(2)：6]。現(xiàn)有研究報(bào)道，歐芹素乙具有較強(qiáng)的抗凝血、鎮(zhèn)靜、抗炎、抗菌、抗誘變等作用，還能抑制由二磷酸腺苷(ADP)、花生四烯酸(AA)、血小板活化因子(PAF)誘導(dǎo)的兔血小板聚集，拮抗腫瘤壞死因子(TNF)、白細(xì)胞介素1(IL-1)對(duì)腦血管平滑肌細(xì)胞的促增殖作用，拮抗TNF促進(jìn)牛腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞與單核細(xì)胞黏附的作用[1.劉厚佳，李鐵軍，邱彥，芮耀誠(chéng)，衛(wèi)立辛，吳孟超，張黎。歐芹素乙對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)作用及對(duì)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子表達(dá)的影響。藥學(xué)實(shí)踐雜志。2009；27(2)：94-98。2.嵇揚(yáng)，曾國(guó)錢。歐芹素乙和異歐芹素乙對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞體外釋放腫瘤壞死因子的影響。第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)。1994；15(6)：511-513。3.李鐵軍，徐添穎，芮耀誠(chéng)，邱彥，張黎，楊鵬遠(yuǎn)。歐芹素乙對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用。第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)。2004；25(4)：431-433。]，但迄今尚未見有關(guān)歐芹素乙具有防治病毒性肝炎或肝損傷作用的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供香豆素類化合物歐芹素乙用于制備防治病毒性肝炎以及抗免疫性或抗化學(xué)性肝損傷藥物的新用途。

經(jīng)體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)表明，歐芹素乙具有抑制乙肝表面抗原(HbsAg)、乙肝病毒e抗原(HbeAg)及抗免疫性或化學(xué)性肝損傷的活性，因此可用于制備防治病毒性肝炎以及抗免疫性或化學(xué)性肝損傷的藥物。

歐芹素乙制備方便、來源廣泛，價(jià)格低廉、安全性高，具有良好的開發(fā)利用前景。本發(fā)明為歐芹素乙提供了一種新用途，也為防治病毒性肝炎以及抗免疫性或化學(xué)性肝損傷提供了一種新的藥物來源。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步闡述，但實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明，本發(fā)明的保護(hù)范圍并不僅僅限于此。

實(shí)施例1??制備歐芹素乙

白芷生藥飲片(上海楊浦中藥飲片廠)粉碎后過120目篩，取1kg粉末，用5L?95％乙醇熱回流提取2次，每次2h，合并提取液，減壓濃縮，回收乙醇，趁熱分離水層。水層放置凝固后，用100ml?40℃無水乙醇溶解，放置析晶。所得結(jié)晶再分別用10ml?40℃的95％乙醇重結(jié)晶3次，用大孔吸附樹脂純化，得歐芹素乙9.6mg。經(jīng)HPLC檢測(cè)，歐芹素乙純度為93.2％。

實(shí)施例2??歐芹素乙對(duì)乙肝病毒HBsAg、HBeAg表達(dá)的影響

1.實(shí)驗(yàn)材料

DMEM培養(yǎng)基：美國(guó)Gibco公司產(chǎn)品，批號(hào)13200-035；

小牛血清：美國(guó)Gibco公司產(chǎn)品，批號(hào)16000-036；

HBsAg檢測(cè)試劑盒：北京科衛(wèi)臨床診斷試劑生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品，批號(hào)：200706003；

HBeAg檢測(cè)試劑盒：北京科衛(wèi)臨床診斷試劑生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品，批號(hào)：200708008；

HepG?2.2.15細(xì)胞，由上海長(zhǎng)海醫(yī)院中心實(shí)驗(yàn)室提供，是共轉(zhuǎn)染法將克隆雙體HBV?DNA及抗G418抗性質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染人肝癌細(xì)胞株HepG2細(xì)胞所建立的，能轉(zhuǎn)錄、翻譯HBV基因，并能長(zhǎng)期穩(wěn)定地向培養(yǎng)上清液中分泌HBsAg和HBeAg，是目前國(guó)內(nèi)外公認(rèn)和常用的體外評(píng)價(jià)抗HBV藥物的細(xì)胞模型。

歐芹素乙，由上海尚誼化工科技有限公司提供，純度98％(下同)。

阿昔洛韋(Aciclovir，ACV)：湖南迪諾制藥有限公司醫(yī)藥工業(yè)研究所產(chǎn)品。

2.細(xì)胞培養(yǎng)條件

HepG?2.2.15細(xì)胞，用含10％胎牛血清(FBS)的DMEM培養(yǎng)基，在體積分?jǐn)?shù)5％CO₂，37℃，飽和濕度下培養(yǎng)。

3.實(shí)驗(yàn)分組