[發明專利]微生物菌體的保存方法及微生物菌體的混懸液

有效

• 申請號: 201010247307.3
• 申請日: 2010-07-26
• 公開（公告）號: CN102010826A
• 公開（公告）日: 2011-04-13
• 發明（設計）人: 竹內雅人
• 申請（專利權）人: 大野綠水株式會社
• 主分類號: C12N1/04
• 分類號: C12N1/04;C12N1/00;C12R1/01
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 吳娟;李炳愛

技術領域

本發明涉及通過將具有腈水合酶活性的微生物菌體以規定濃度在菌體混懸液中保存來穩定地保存該微生物菌體的方法。此外，本發明還涉及以規定濃度含有具有腈水合酶活性的微生物菌體的菌體混懸液。?

背景技術

微生物產生的酶在很多情況下作為化學轉化反應的酶而使用。尤其是通過利用具有腈基的水合或水解作用的腈水合酶、腈水解酶等，可以廉價地生產在化學工業上重要的酰胺、羧酸、α-羥基羧酸等。此外，通過利用具有光學特異性的水合能力或光學特異性的水解能力的上述酶，也可以生產作為醫藥、農藥的生產原料的重要的光學活性羧酸、氨基酸、α-羥基羧酸等。?

在將微生物酶作為催化劑的化學轉化反應中，有必要將培養及收集的微生物菌體穩定保存至使用之時。即，在保存時不能出現由于混入雜菌、腐敗或是溶菌而使微生物酶的催化能力失去或降低。因此，一般情況下，通過使用穩定劑、代謝阻礙劑和高濃度鹽類來抑制微生物菌體保存時微生物酶的失活、腐敗和溶菌，從而應用于化學轉化反應中。在不添加上述穩定劑的情況下，已知可以通過凍結、冷藏或持續攪拌來維持酶的活性，同時進行保存。?

例如，對于具有腈水合酶活性的微生物，已知有在含有高濃度的無機鹽類的水溶液中保存的方法(專利文獻1)、通過凍結進行保存的方法(專利文獻2)等。?

參考文獻?

專利文獻

[專利文獻1]日本專利第3163224號?

[專利文獻2]日本特開第2003-219870號公報?

發明內容

發明所要解決的課題

在這些保存方法中，使用含有高濃度的無機鹽類的水溶液的方法因為在后續的工序中需要進行洗滌等，故有對產品的品質造成影響之虞，且生產方法也繁雜。此外，通過凍結來保存的方法中，存在凍結、融解操作很繁雜等操作性上的問題，且伴隨著此操作，有酶活性失去或下降之虞。?

解決課題的手段

本發明者們對廉價且穩定地保存培養、收集得到的微生物菌體的混懸液的條件進行了深入的研究，結果發現通過將菌體濃縮為4～20質量％的范圍的濃度，可在目前通常情況下還基本未考慮的在室溫下，且無需攪拌也不引起溶菌和酶失活地穩定保存，從而完成本發明。?

即，本發明涉及微生物菌體的保存方法，其特征在于，將具有腈水合酶活性的微生物菌體，以干燥菌體質量為4～20質量％的濃度在分散介質中保存。此外，本發明還涉及以干燥菌體質量為4～20質量％的菌體濃度含有具有腈水合酶活性的微生物菌體的微生物菌體的混懸液。?

發明效果?

依據本發明，通過將菌體混懸液中含有的微生物菌體的濃度控制在一定范圍內，可以在室溫下、即使不攪拌也不出現腐敗或酶的劣化而維持腈水合酶等的酶活性的情況下，長時間保存大量菌體。?此外，依據本發明，能夠提供在使用微生物菌體時無需洗滌、可大幅削減現有的保存方法所必需的勞動力和成本、在工業上令人滿意的微生物菌體的保存方法。?

發明的實施方式?

以下，對本發明進行詳細的說明。以下的實施方式，是用于說明本發明的示例，但本發明并不僅限于此實施方式。只要不脫離其原理，可以以各式各樣的形態來實施。?

需要說明的是，本說明書中引用的全部文獻和公開公報、專利公報以及其它的專利文獻，均作為參考包含于本說明書中。此外，本說明書包含2009年7月24日提交的作為本申請優先權主張的基礎的日本國專利申請(日本特愿2009-173162號)的說明書中記載的內容。?