[發明專利]快速檢測黃曲霉毒素總量的高靈敏度免疫層析試紙條及其制備方法

有效

• 申請號: 201010245801.6
• 申請日: 2010-08-05
• 公開（公告）號: CN101930006A
• 公開（公告）日: 2010-12-29
• 發明（設計）人: 李培武;張道宏;張奇;張文;丁小霞;姜俊;陳小媚
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院油料作物研究所
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/531;G01N33/52;G01N33/558
• 代理公司: 湖北武漢永嘉專利代理有限公司 42102
• 代理人: 胡建平

技術領域

本發明屬生物檢測領域，具體涉及一種快速檢測黃曲霉毒素總量的高靈敏度免疫層析試紙條及其制備方法。

背景技術

黃曲霉毒素主要是由黃曲霉和寄生曲霉分泌產生的次生代謝產物，是一種能引起人畜各種損害的天然有毒化合物。黃曲霉毒素(AFT)目前已發現20余種，其中最主要的是黃曲霉毒素B1、B2、G1和G2。

黃曲霉毒素污染食品及飼料后，會直接或間接進入人類食品鏈，威脅人類的健康和生命安全，其危害程度與黃曲霉毒素的攝入量成正比。黃曲霉毒素廣泛存在于大米、玉米、花生、芝麻、大豆、菜籽等農產品和魚肉等食品中，其污染食品及飼料的環節多、而且多種黃曲霉毒素往往同時存在，為此世界各國都規定了食品及飼料中黃曲霉毒素總量(黃曲霉毒素B1、B2、G1和G2的總量)的最大允許含量并將其作為強制性標準，因此加強對食品及飼料中黃曲霉毒素總量的檢測、特別是速測，以便及時了解和掌握食品及飼料的衛生信息，是增強食品安全性的一個重要環節。

現有技術中常用的黃曲霉毒素檢測技術主要有薄層層析法、精密儀器分析法、免疫學分析法。免疫學分析法克服了前兩者的缺點，具有特異性強、靈敏度高、樣品前處理簡單、成本低、對實驗人員和環境的污染危害小、適于現場批量檢測等優點。其中基于納米金的免疫層析快速檢測技術具有簡便、快速、靈敏、適于現場檢測的優點，具有極大的應用價值和應用前景。目前已有針對黃曲霉毒素單一組分如黃曲霉毒素B1(AFB1)的快速檢測試紙條問世，但是因為絕大多數被黃曲霉毒素污染的樣品都不止含有AFB1一種黃曲霉毒素，從而易對檢測結果造成干擾或交叉污染，并且市售黃曲霉毒素免疫層析檢測試紙條靈敏度相對偏低，檢測限為5-200ng/g，不能夠很好地滿足當前更加嚴格的黃曲霉毒素限量標準的檢測需求。因此，研究建立一種針對黃曲霉毒素總量的高靈敏度免疫層析試紙條對于監控食品和農產品中的黃曲霉毒素具有很重要的意義和應用價值。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是針對上述現有技術存在的不足而提供一種快速檢測黃曲霉毒素總量的高靈敏度免疫層析試紙條及其制備方法。該試紙條用于檢測黃曲霉毒素總量(黃曲霉毒素B1、B2、G1和G2的總量)，具有檢測快速，操作簡單，靈敏度高的特點。

本發明為解決上述技術問題所采用的技術方案為：

快速檢測黃曲霉毒素總量的高靈敏度免疫層析試紙條(見圖1和圖2)，包括紙板，紙板的一面從上到下依次粘貼吸水墊、檢測墊、金標墊和樣品墊，相鄰各墊在連接處交疊連接，所述檢測墊以硝酸纖維素膜為基墊，硝酸纖維素膜上自上而下設置橫向質控線和檢測線，所述檢測線包被有黃曲霉毒素B1-牛血清白蛋白偶聯物(AFB1-BSA)，質控線包被有兔抗鼠多克隆抗體；所述金標墊橫向噴涂有納米金標記的抗黃曲霉毒素通用單克隆抗體，所述抗黃曲霉毒素通用單克隆抗體由保藏號為CCTCC?NO.C201013的雜交瘤細胞株1C11產生。

按上述方案，所述的吸水墊長16～18mm，寬2～4mm；檢測墊長25～30mm，寬2～4mm；金標墊長6～9mm，寬2～4mm；樣品墊長12～18mm，寬2～4mm，相鄰各墊的交疊長度為1～3mm。

按上述方案，所述的吸水墊為吸水紙。

按上述方案，所述檢測墊上的檢測線與硝酸纖維素膜上沿的間距為15～20mm，質控線和檢測線的間距為5～10mm。

按上述方案，所述檢測墊上每厘米檢測線所需的黃曲霉毒素B1-牛血清白蛋白偶聯物(AFB1-BSA)的包被量為80～400ng；每厘米質控線所需的兔抗鼠多克隆抗體的包被量為200～500ng。

按上述方案，所述金標墊中所用的納米金的粒徑為15～20nm；所述金標墊上每厘米噴涂長度所需的納米金標記的抗黃曲霉毒素通用單克隆抗體的用量為48～144ng。

如上所述的快速檢測黃曲霉毒素總量的高靈敏度免疫層析試紙條的制備方法，包括以下步驟：

(1)吸水墊的制備

將吸水紙剪裁即得吸水墊；

(2)檢測墊的制備

檢測線的包被：

將黃曲霉毒素B1-牛血清白蛋白的偶聯物(AFB1-BSA)配制成0.1～0.5mg/mL的包被液A；于距離硝酸纖維素膜上沿為15～20mm的位置，用點噴方式將包被液A橫向包被于硝酸纖維素膜上得到檢測線，每厘米檢測線上所需黃曲霉毒素B1-牛血清白蛋白的偶聯物(AFB1-BSA)的包被量為80～400ng，然后于37～40℃條件下干燥8～20分鐘；

質控線的包被：