[發明專利]半定量化檢測黃曲霉毒素B1的多檢測線免疫層析試紙條及其制備方法

無效

• 申請號: 201010245094.0
• 申請日: 2010-08-05
• 公開（公告）號: CN101900728A
• 公開（公告）日: 2010-12-01
• 發明（設計）人: 李培武;張道宏;張奇;張文;丁小霞;姜俊;陳小媚
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院油料作物研究所
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558;G01N33/532
• 代理公司: 湖北武漢永嘉專利代理有限公司 42102
• 代理人: 胡建平

1.半定量化檢測黃曲霉毒素B1的多檢測線免疫層析試紙條，其特征在于：包括紙板，紙板的一面從上到下依次粘貼吸水墊、檢測墊、金標墊、樣品墊，相鄰各墊在連接處交疊連接，所述檢測墊以硝酸纖維素膜為基墊，硝酸纖維素膜上自上而下設置橫向質控線、檢測線I、檢測線II和檢測線III，所述質控線包被有兔抗鼠多克隆抗體，所述檢測線I、檢測線II和檢測線III分別包被有黃曲霉毒素B1-牛血清白蛋白偶聯物；所述金標墊橫向噴涂有納米金標記的黃曲霉毒素B1單克隆抗體。

2.根據權利要求1所述的半定量化檢測黃曲霉毒素B1的多檢測線免疫層析試紙條，其特征在于：所述的吸水墊長16～18mm，寬2～4mm；檢測墊長25～30mm，寬2～4mm；金標墊長6～9mm，寬2～4mm；樣品墊長12～18mm，寬2～4mm，相鄰各墊的交疊長度為1～3mm。

3.根據權利要求1或2所述的半定量化檢測黃曲霉毒素B1的多檢測線免疫層析試紙條，其特征在于：所述檢測墊上檢測線I、檢測線II和檢測線III距硝酸纖維素膜上沿的距離分別為11～17mm、13～19mm、15～21mm，且每相鄰兩條檢測線的間距最小為2mm；所述質控線與檢測線I的距離為5～11mm。

4.根據權利要求1或2所述的半定量化檢測黃曲霉毒素B1的多檢測線免疫層析試紙條，其特征在于：所述檢測墊上每厘米檢測線I、檢測線II和檢測線III上所需黃曲霉毒素B1-牛血清白蛋白偶聯物的包被量分別為120～600ng，40～200ng和20～100ng；每厘米質控線上所需兔抗鼠多克隆抗體的包被量為200～500ng。

5.根據權利要求1或2所述的半定量化檢測黃曲霉毒素B1的多檢測線免疫層析試紙條，其特征在于：所述金標墊中所用的納米金的粒徑為15～20nm；所述金標墊上每厘米噴涂長度所需納米金標記的黃曲霉毒素B1單克隆抗體的用量為60～216ng。

6.根據權利要求1或2所述的半定量化檢測黃曲霉毒素B1的高靈敏度免疫層析試紙條的制備方法，其特征在于：包括以下步驟：

(1)吸水墊的制備

將吸水紙剪裁即得吸水墊；

(2)檢測墊的制備

檢測線的包被：

將市售黃曲霉毒素B1-牛血清白蛋白偶聯物配制成0.1～0.5mg/mL的包被液A；于距硝酸纖維素膜上沿11～17mm、13～19mm、15～21mm的位置，用點噴方式將包被液A依次橫向包被于硝酸纖維素膜上，得到檢測線I、檢測線II和檢測線III，且每條檢測線之間的間距至少為2mm，每厘米檢測線I、檢測線II和檢測線III所需的黃曲霉毒素B1-牛血清白蛋白偶聯物(AFB1-BSA)的包被量分別為120～600ng，40～200ng和20～100ng，再于37～40℃條件下干燥8～20分鐘；

質控線的包被：

將兔抗鼠多克隆抗體配制成0.4～0.6mg/mL的包被液B；于距硝酸纖維素膜上檢測線I的距離為5～11mm，用點噴方式將包被液B橫向包被于硝酸纖維素膜上，得到質控線，每厘米質控線所需的兔抗鼠多克隆抗體的包被量為200～500ng，然后于37～40℃條件下干燥8～20分鐘；

(3)樣品墊的制備

將玻璃纖維膜放入封閉液A中浸濕，取出，于37～40℃條件下干燥10～16小時，得樣品墊，然后置于干燥器中室溫保存；

(4)金標墊的制備

用點噴方式將納米金標記的黃曲霉毒素B1單克隆抗體溶液橫向噴涂于樣品墊上，每厘米噴涂長度所需納米金標記的抗黃曲霉毒素B1單克隆抗體的量為60～216ng，真空冷凍干燥2～6h，即得金標墊，然后置于干燥器中室溫保存；

(5)半定量化檢測黃曲霉毒素B1的多檢測線免疫層析試紙條的組裝

在紙板的一面從上到下依次粘貼吸水墊、檢測墊、金標墊和樣品墊，相鄰各墊在連接處交疊連接，交疊長度為1～3mm，即得半定量化檢測黃曲霉毒素B1的多檢測線免疫層析試紙條。