[發明專利]一種雙向特異性配體靶向逆轉錄病毒的方法

無效

• 申請號: 201010243428.0
• 申請日: 2010-08-03
• 公開（公告）號: CN102344492A
• 公開（公告）日: 2012-02-08
• 發明（設計）人: 徐學明;劉鐳;王天欣
• 申請（專利權）人: 西安杰諾瓦生物科技有限公司
• 主分類號: C07K16/28
• 分類號: C07K16/28;C07K16/10;C12N15/11;C12N15/867
• 代理公司: 西安新思維專利商標事務所有限公司 61114
• 代理人: 黃秦芳

技術領域

本發明屬于醫藥生物技術領域，具體涉及在體內和體外能夠靶向傳遞逆轉錄病毒的高效基因治療技術領域，進一步涉及一種雙向特異性配體靶向逆轉錄病毒的方法。

背景技術

目前，高效的基因治療工具已經具備能夠準確通過適當的載體將目的基因送達體內特異性細胞或者組織的特點。逆轉錄病毒，如慢病毒，因其自身具有穩定轉染，可整合入基因組長期表達，以及促進感染細胞轉化成為非分裂細胞等功能顯示出了良好的應用前景。

許多研究以病毒載體假型嵌和包膜相結合的方法研制開發出了針對慢病毒包膜蛋白的嵌合抗體，目前已經提高了慢病毒的基因傳遞特異性。在未來基因治療領域中，這些研究工作為進一步修飾和改進傳遞載體系統方法的應用奠定了基礎。

在眾多方法中一個相類似的策略就是應用非偶聯的方法靶向識別細胞，這種方法是采用融合表達的方法使獨立的蛋白表達在病毒載體的表面。該方法已被證實，其制備更為簡便，同時可以促進γ逆轉錄病毒和慢病毒載體靶向特異性細胞。這種方法采用配體蛋白或者細胞特異性抗體作為橋梁在體外將載體靶向傳遞到未經修飾的具有禽肉瘤或者造血細胞組織增生病毒的特異性細胞包膜蛋白處。

25年前，單克隆抗體和重組DNA技術的結合使得構建在正常自然條件下所存在的以抗體為基礎的生物分子成為可能。其中，第一批雙向特異性抗體，其表面類似普通免疫球蛋白分子，但是其中兩個結合臂卻具有截然不同的結合特異性。使用該種方法Staerz等人將雙向特異性抗體結合于細胞毒性T細胞，從而達到靶向裂解腫瘤細胞的目的。從那以后，人們構建了不同種類的雙向特異性抗體來靶向腫瘤細胞。但是，這種方法的特點和局限性也逐漸顯示出來。與此同時，將雙向特異性抗體結合于其他細胞毒性免疫細胞的生物工程治療方法也已經陸續被研發和構建出來。例如：靶向巨噬細胞表面的FcgRI/CD64和腫瘤細胞表面的HER2/neu或者EGFR。同時，越來越多的嵌合抗體及其與化療藥物偶聯的藥物已經在試驗中取得了良好的結果且被批準應用于腫瘤的臨床治療。

盡管科研人員不斷改進并減少生物工程制劑在臨床應用過程中存在的問題，但單克隆抗體治療腫瘤仍然具有其局限性，藥物的靶向傳遞效率依然未能達到理想水平。然而，正是這些在臨床治療中存在的問題為生物工程藥物的進一步改進提出了要求。

臨床治療中，針對不同疾病的有效基因治療方法應具備以下特點：利用最佳條件高效并特異性靶向傳遞治療基因到目的細胞；同時，還要保持該基因的穩定轉染和長期表達特性。目前，常采用血液直接注射的方法將藥物引入體內，然后通過載體歸巢的方法將目的基因靶向傳遞至細胞或者器官。

因此，現階段已經有研究應用生物工程和基因重組的方法以不同病毒載體為基礎開發出靶向基因治療傳遞系統。腺病毒和腺相關病毒載體已經因為它們具有結合和感染機理單一的優點而被應用于靶向基因傳遞策略。盡管這些經過改進的病毒載體已經被成功應用于體外靶向特異性細胞，但卻因為它們自身的非特異導向性（特別是在肝臟細胞）以及改構以后影響病毒載體的感染能力等缺點，使得它們在體內的應用受到了限制。

與腺病毒不同，逆轉錄病毒載體顆粒是介導多核酸進入細胞（如真核細胞）的另一種重要工具。“介導”一詞包括多種將多核苷酸轉移入細胞的方法。其中包括轉化、轉導和轉染等。

逆轉錄病毒是RNA病毒，因此病毒基因組是RNA，當宿主細胞感染逆轉錄病毒后，基因組RNA反轉錄成為DNA中間體，介導病毒基因高效整合入感染細胞的染色體DNA中。整合的DNA中間體是指前病毒。逆轉錄病毒家族是包膜單鏈RNA病毒，主要感染哺乳動物，如牛、猴、羊和人以及禽類和鼠類等。逆轉錄病毒在眾多RNA病毒中，以它們通過RNA合成DNA拷貝并且能夠整合入感染細胞的基因組的多種特殊方式而顯示出其獨特的應用價值。

逆轉錄病毒家族中按照目前國際病毒分類標準，可分為7個屬：α逆轉錄病毒屬Alpharetrovirus，β逆轉錄病毒屬?Betaretrovirus，γ逆轉錄病毒屬Gammaretrovirus，δ逆轉錄病毒屬?Deltaretrovirus，ε逆轉錄病毒屬Epsilonretrovirus，慢病毒屬?Lentivirus和泡沫病毒屬?Spumavirus。其中，慢病毒包括：HIV-1、HIV-2和SIV；γ逆轉錄病毒包括：白血病病毒（鼠白血病病毒MLVs和貓白血病病毒）。

如何將逆轉錄病毒應用于體內靶向特異性細胞或組織目前還是一個難題。

發明內容