[發(fā)明專利]三碘甲狀腺原氨酸定量檢測試劑盒及其制備方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201010243061.2 | 申請日： | 2010-08-03 |
| 公開（公告）號： | CN101949944A | 公開（公告）日： | 2011-01-19 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 高曉丹;陳曉玲;劉保鑫;付光宇;渠海;馬建軍;項(xiàng)立紅;吳學(xué)煒;苗擁軍 | 申請（專利權(quán)）人： | 鄭州安圖綠科生物工程有限公司 |
| 主分類號： | G01N33/78 | 分類號： | G01N33/78;G01N33/577;G01N33/535 |
| 代理公司： | 鄭州異開專利事務(wù)所(普通合伙) 41114 | 代理人： | 王霞 |
| 地址： | 450016 河南省鄭州*** | 國省代碼： | 河南;41 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 甲狀腺 氨酸 定量 檢測 試劑盒 及其 制備 方法 | ||
1.一種三碘甲狀腺原氨酸定量檢測試劑盒，其特征在于：它包括包被有二碘甲狀腺原氨酸--明膠的磁微?；鞈乙?、三碘甲狀腺原氨酸系列校準(zhǔn)品、辣根過氧化物酶標(biāo)記的三碘甲狀腺原氨酸抗體、解離劑、發(fā)光底物A液、發(fā)光底物B液及濃縮洗液。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的三碘甲狀腺原氨酸定量檢測試劑盒，其特征在于：所述包被有二碘甲狀腺原氨酸--明膠的磁微粒混懸液中，所采用的磁微粒粒徑為0.8-1.5um，表面含有濃度為20-30ueq/g的羧基活性基團(tuán)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的三碘甲狀腺原氨酸定量檢測試劑盒，其特征在于：所述三碘甲狀腺原氨酸系列校準(zhǔn)品采用去激素血清為基質(zhì)，加入三碘甲狀腺原氨酸純品配制而成。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的三碘甲狀腺原氨酸定量檢測試劑盒，其特征在于：所述辣根過氧化物酶標(biāo)記的三碘甲狀腺原氨酸抗體，是將辣根過氧化物酶與鼠抗三碘甲狀腺原氨酸單克隆抗體相連接。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的三碘甲狀腺原氨酸定量檢測試劑盒，其特征在于：所述解離劑為含有1-苯胺基-8-萘磺酸的Tris-NaCl緩沖液。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的三碘甲狀腺原氨酸定量檢測試劑盒，其特征在于：所述發(fā)光底物A液由酶促化學(xué)發(fā)光底物、增強(qiáng)劑和氨基酸組成；發(fā)光底物B液由氨基酸氧化酶和穩(wěn)定劑組成。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的三碘甲狀腺原氨酸定量檢測試劑盒，其特征在于：所述濃縮洗液為含有穩(wěn)定劑和表面活性劑的磷酸鹽緩沖液。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的三碘甲狀腺原氨酸定量檢測試劑盒的制備方法，其特征在于：它包括下述步驟：
第一步，包被有二碘甲狀腺原氨酸-明膠的磁微?；鞈乙旱闹苽?/p>
根據(jù)使用量取羧基磁微粒，用EDC和NHS在酸性條件下進(jìn)行活化，活化完成后，加磁場，靜置使磁微粒與液體分開，棄去上清，用PH7.6的0.01M的PBS緩沖液洗去多余活化劑；加入適量的二碘甲狀腺原氨酸-明膠，使其濃度為0.5ul/mg磁微粒，在弱堿性條件下震蕩反應(yīng)；反應(yīng)結(jié)束后加磁場，靜置使磁微粒與液體分開，棄去上清，用含有1％牛血清白蛋白的0.01M的PBS緩沖液進(jìn)行封閉，封閉結(jié)束后，加入封閉液以保存磁微粒，使磁微粒的最終濃度為0.5mg/ml；該磁微粒混懸液置于2-8度保存，以備使用；
第二步，三碘甲狀腺原氨酸系列校準(zhǔn)品的制備
用含有0.1％-0.2％NaN3和0.15％-0.25％PC300的去激素血清將三碘甲狀腺原氨酸純品配制成標(biāo)示濃度為0ng/ml、0.5ng/ml、1ng/ml、2.5ng/ml、5ng/ml、10ng/ml的-系列校準(zhǔn)品；
第三步，辣根過氧化物酶標(biāo)記的三碘甲狀腺原氨酸抗體的制備
用活化劑1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺將辣根過氧化物酶上的氨基活化，然后加入鼠抗三碘甲狀腺原氨酸單克隆抗體，使抗體上的羧基與活化過的氨基縮合為酰胺化合物，透析后既得三碘甲狀腺原氨酸酶標(biāo)抗體；在標(biāo)記好的溶液中，等比加入甘油-20度保存?zhèn)溆茫?/p>
第四步，解離劑的配制
取純化水、Tris、NaCl、Procl?in300、解離劑ANS按照下述比例配制成解離劑：純化水1000ml、Tris?6.05g、NaCl?8.5g、Proclin3002ml、解離劑ANS1-3g；
第五步，發(fā)光底物A液和發(fā)光底物B液的配制
發(fā)光底物A液：取0.2M?Tris-Hcl、0.15mM?Luminol、0.59mM羥基香豆素、0.59mM沒食子酸配制而成；
發(fā)光底物B液：取0.2M乙酸-乙酸鹽緩沖、0.85mM氨基酸氧化酶、0.008tween20、0.5mM二乙烯三胺五乙酸、0.12mM維生素C配制而成；
第六步，濃縮洗液的配制
取NaH2PO4·2H2O、Na2HPO4·12H2O、NaCl、Tween20、蒸餾水按照下述比例配制而成：NaH2PO4·2H2O?4.6g、Na2HPO4·12H2O?62.32g、NaCl?175.6g、Tween202-10ml、蒸餾水1000ml。
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