[發明專利]一種酰化支鏈淀粉修飾卡介菌多糖核酸口服獸用脂質體及其凍干制劑

無效

• 申請號: 201010242300.2
• 申請日: 2010-08-02
• 公開（公告）號: CN101926771A
• 公開（公告）日: 2010-12-29
• 發明（設計）人: 鮑恩東;王曉斌;呂英軍;蘇建東
• 申請（專利權）人: 南京農業大學;南京瑞農新獸藥開發工程技術有限公司
• 主分類號: A61K9/127
• 分類號: A61K9/127;A61K9/19;A61K47/36;A61K35/74;A61K31/739;A61P37/04;A61K31/7105
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責任公司 32218
• 代理人: 徐冬濤;劉成群

1.一種酰化支鏈淀粉修飾的卡介菌多糖核酸口服獸用脂質體，其特征在于該脂質體的配方含有以下重量份的原料：

卡介菌多糖核酸????1份

酰化支鏈淀粉??????1-10份

磷脂??????????????10-50份

膽固醇????????????1-10份。

2.根據權利要求1所述的卡介菌多糖核酸口服獸用脂質體，其特征在于該脂質體的配方含有以下重量份的原料：

卡介菌多糖核酸????1份

酰化支鏈淀粉??????3-4份

磷脂??????????????20-25份

膽固醇????????????2-3份。

3.根據權利要求1或2所述的卡介菌多糖核酸脂質體，其特征在于酰化支鏈淀粉為碳鏈中碳原子數目從6～20的酰化支鏈淀粉；優選為正己酸酰化支鏈淀粉、月桂酸酰化支鏈淀粉或棕櫚酸酰化支鏈淀粉；磷脂為天然磷脂和/或合成磷脂，其中天然磷脂為卵磷脂或大豆磷脂，合成磷脂為二棕櫚酰磷脂酰膽堿。

4.根據權利要求1或2所述的卡介菌多糖核酸脂質體，其特征在于酰化支鏈淀粉為取代度為0.1-1的酰化支鏈淀粉。

5.一種酰化支鏈淀粉修飾的卡介菌多糖核酸口服獸用脂質體凍干制劑，其特征在于在權利要求1或2所述的原料中再加入賦形劑，卡介菌多糖核酸與賦形劑的重量比為1∶30～100，通過冷凍干燥制備成凍干制劑。

6.根據權利要求5所述的卡介菌多糖核酸脂質體凍干制劑，其特征在于賦形劑選自甘露醇、蔗糖、右旋糖甘、山梨醇、葡萄糖和海藻糖中的一種或幾種，。

7.權利要求1或2所述的卡介菌多糖核酸脂質體的制備方法，其特征在于包括以下步驟：

a.酰化支鏈淀粉修飾前的卡介菌多糖核酸脂質體的制備：采用薄膜分散法、乙醇注入法、逆相蒸發法、乙醚注入法或機械法等常規方法制備脂質體混懸液；

b.制備得到脂質體混懸液后，將脂質體混懸液沖入氮氣在室溫下緩慢攪拌，將酰化支鏈淀粉溶液以恒定速度滴入脂質體混懸液中，滴加完畢后在室溫下孵化1～3小時，得到混懸液備用；

c.使用pH7～8的磷酸鹽緩沖液加入到混懸液中，調節混懸液的pH到7.4，得到酰化支鏈淀粉修飾卡介菌多糖核酸脂質體；

d.更進一步，可將步驟c得到的酰化支鏈淀粉修飾卡介菌多糖核酸脂質體進行二次均質和/或擠壓，得到所需脂質體；也可以不進行二次均質和/或擠壓。

8.根據權利要求7所述的卡介菌多糖核酸脂質體的制備方法，其特征在于包括以下步驟：

a.酰化支鏈淀粉修飾前的卡介菌多糖核酸脂質體混懸液的制備：稱取處方量的卡介菌多糖核酸、磷脂和膽固醇溶解于適量的90％乙醇溶液中，通入氮氣后混合均勻，放入溫度30～45℃的水浴中用旋轉蒸發儀抽干乙醇，形成均一的磷脂膜，使用pH7.4的磷酸鹽緩沖液洗脫磷脂膜；將得到的脂質體混懸液進行均質和/或擠壓，得到脂質體混懸液；

b.將得到的脂質體混懸液沖入氮氣在室溫下緩慢攪拌，將酰化支鏈淀粉溶液以恒定速度滴入脂質體混懸液中，滴加完畢后在室溫下孵化1～3小時，得到混懸液備用；

c.使用pH7～8的磷酸鹽緩沖液加入到步驟b所得的混懸液中混合，調節混懸液的pH到7.4左右，得到酰化支鏈淀粉修飾卡介菌多糖核酸脂質體；

d.更進一步，可將步驟c得到的酰化支鏈淀粉修飾卡介菌多糖核酸脂質體進行二次均質和/或擠壓，得到所需脂質體；也可以不進行二次均質和/或擠壓。

9.根據權利要求7或8所述的卡介菌多糖核酸脂質體的制備方法，其特征在于均質采用Niro?Soavi?Ns1001L均質機，在一級閥1100～1250bar和二級閥200～250bar的壓力下均質3～5次；擠壓采用200nm的濾膜通過擠出儀擠壓出來。

10.權利要求5或6所述的卡介菌多糖核酸脂質體凍干粉的制備方法，其特征在于包括以下步驟：

稱取處方量的賦形劑溶解于適量的水中，混合均勻后，將制備得到的酰化支鏈淀粉修飾卡介菌多糖核酸脂質體緩慢滴入到溶液中，邊滴入邊攪拌，得到穩定的混懸液后通過0.2μm的微孔濾膜過濾滅菌后在零下70℃下放置一天，然后放入凍干機中進行凍干，凍干完畢后沖入氮氣封口。