[發明專利]一種海洋黑曲霉生產耐鹽纖維素酶的固體發酵方法

有效

• 申請號: 201010242261.6
• 申請日: 2010-07-30
• 公開（公告）號: CN102010856A
• 公開（公告）日: 2011-04-13
• 發明（設計）人: 姚善涇;薛棟升;林東強;劉杰鳳
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: C12N9/42
• 分類號: C12N9/42;C12N1/14;C12R1/685
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司 33200
• 代理人: 張法高

1.一種海洋黑曲霉生產耐鹽纖維素酶的固體發酵方法，其特征在于包括如下步驟：

1)從東海近海10～20m深處的泥土里篩選得到一株海洋黑曲霉(Aspergillus?sp)，保藏于中國典型培養物保藏中心，地址為中國.武漢.武漢大學，保藏中心保藏編號為CCTCC?NO：M2010132；

2)海洋黑曲霉接種于PDA培養基上，40℃下培養90h，得到斜面孢子，斜面孢子保藏于4℃；

3)斜面孢子接種于PDA-1培養基，在40℃下培養90h，得到活化的孢子；

4)60g茄子瓶斜面培養基裝入250ml茄子瓶后壓實成斜面，瓶口用8層紗布封口，得到茄子瓶斜面，活化的孢子接種于茄子瓶斜面，42℃培養74h，得到擴培的茄子瓶斜面孢子；

5)400ml人工海水裝入500ml容量瓶內，放入滅菌鍋，在121℃，滅菌20min，得到滅菌的人工海水，擴培得到的茄子瓶斜面孢子用滅菌的人工海水稀釋到10⁸個孢子/ml，接種于固體發酵產酶培養基，在250ml錐形瓶內，接種量0.1～0.7ml、起始pH?6.0～7.0、溫度42～44℃和發酵8～12天，得到纖維素酶。

2.根據權利要求1所述的一種海洋黑曲霉生產耐鹽纖維素酶的固體發酵方法，其特征在于所述的PDA培養基的組成為：葡萄糖20g和馬鈴薯200g添加水煮沸30min三層紗布過濾的濾液1L。

3.根據權利要求1所述的一種海洋黑曲霉生產耐鹽纖維素酶的固體發酵方法，其特征在于所述的PDA-1培養基的組成為：200g馬鈴薯經人工海水煮沸30min后的濾液1L，葡萄糖20g，人工海水的組成為：NaCl?29.8g、MgSO₄?5.4g、KCl?0.73g、MgCl₂.6H₂O?10.7g、CaCl₂?0.8306g和蒸餾水1.0L。

4.根據權利要求1所述的一種海洋黑曲霉生產耐鹽纖維素酶的固體發酵方法，其特征在于所述的茄子瓶斜面培養基的組成為：200g馬鈴薯人工海水煮沸30min的濾液130ml，葡萄糖7～9g，稻草粉70～90g，人工海水的組成為：NaCl?29.8g、MgSO₄?5.4g、KCl?0.73g、MgCl₂.6H₂O?10.7g、CaCl₂?0.8306g和蒸餾水1.0L。

5.根據權利要求1所述的一種海洋黑曲霉生產耐鹽纖維素酶的固體發酵方法，其特征在于所述的固體發酵產酶培養基以質量比計的組成為：稻草和麩皮10～25％，NH₄Cl?0.10～0.15％、NaCl?1.0～3.0％、Na₂SO₄?0.05～1％、其余為人工海水，稻草和麩皮的質量比為3∶2，人工海水的組成為：NaCl?29.8g、MgSO₄5.4g、KCl?0.73g、MgCl₂.6H₂O?10.7g、CaCl₂?0.8306g和蒸餾水1.0L。?