[發明專利]一種生物轉化合成普拉特霉素A1的方法

有效

• 申請號: 201010242043.2
• 申請日: 2010-08-02
• 公開（公告）號: CN102344946A
• 公開（公告）日: 2012-02-08
• 發明（設計）人: 曹芹;吳家鑫;蔡健;鄭應華;齊鵬;葛辛玫
• 申請（專利權）人: 中牧實業股份有限公司
• 主分類號: C12P17/08
• 分類號: C12P17/08;C07H1/06;C07H17/08;C12R1/465
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1.一種發酵轉化麥迪霉素為普拉特霉素A1的方法，其特征在于：以麥迪霉素為前體，利用耐熱鏈霉菌(Streptomyces?thermophilus)ST-1，進行生物轉化生產普拉特霉素A1。

2.一種如權利要求1所述發酵轉化麥迪霉素為普拉特霉素A1的方法，包括如下步驟：

(1)將在種子培養基中培養好的種子液接入發酵培養基開始發酵；

(2)當發酵過程中補入底物麥迪霉素和葡萄糖，進行生物轉化合成普拉特霉素A1；

(3)對含有普拉特霉素A1的發酵液進行提取、分離、純化，得到高純度普拉特霉素A1。

3.如權利要求1所述的生物轉化合成普拉特霉素A1的方法，其特征在于：發酵培養基菌種接種量為2-10％；發酵溫度為25℃-35℃；發酵轉化過程中，菌種培養30-40hr后開始補入麥迪霉素底物。

4.如權利要求1所述生物轉化合成普拉特霉素A1的發酵條件，其特征在于：耐熱鏈霉菌ST-1的種子培養基組分為：大豆粉，玉米淀粉，酵母提取物，K₂HPO₄，MgSO₄·7H₂O；發酵轉化培養基組分為：玉米淀粉，大豆粉，酵母提取物，MgSO₄·7H₂O，K₂HPO₄，KH₂PO₄；種子培養溫度為25℃-35℃、pH為6.0-8.0，種子培養時間為24-48小時，發酵轉化溫度為25℃-35℃、pH為6.0-8.0；種子在發酵培養基中生長約30-40小時后，一次性補入底物麥迪霉素。

5.如權利要求3所述生物轉化合成普拉特霉素A1的發酵條件，其特征在于：所述底物麥迪霉素為麥迪霉素可溶性鹽溶液。

6.一種普拉特霉素A1的提取、分離、純化方法，包括如下步驟：

(1)一次酸溶：用無機酸或有機酸調節發酵液成酸性，pH達2-6，攪拌，離心或膜過濾，得到普拉特霉素A1的一次酸溶液；

(2)堿沉淀除雜質：上述“普拉特霉素A1一次酸溶液”加入堿性溶液調pH7.0-8.0，發酵液離心或過濾，保留發酵液濾液；

(3)上述發酵液濾液繼續加入堿性溶液調pH9.0-11.0，發酵液離心或過濾，得到“普拉特霉素A1一次堿沉淀”；

(4)“普拉特霉素A1一次堿沉淀”中加入酸性溶液調pH2.0-6.0，溶解該沉淀，得到“普拉特霉素A1鹽溶液”；

(5)“普拉特霉素A1鹽溶液”中加入堿性物質調pH9.0-11，發酵液離心或過濾，得到“普拉特霉素A1二次堿沉淀”，對該沉淀物進行常規精制、干燥處理，得到較純的“普拉特霉素A1堿固體物”成品；

(6)“普拉特霉素A1堿固體物”用ODS或三硅酸鎂層析柱進行層析分離，分段收集，結合高效液相色譜檢測，收到純度較高的“普拉特霉素A1堿甲醇溶液”，蒸干濃縮得到高純度的普拉特霉素A1固體。

7.一種如權利要求6所述麥迪霉素轉化普拉特霉素A1的提取、分離、純化方法，其特征在于所述的堿性溶液包括氫氧化鈉、氫氧化鉀、碳酸鈉、碳酸氫鈉、氨水中的一種。

8.一種如權利要求6所述麥迪霉素轉化普拉特霉素A1的提取、分離、純化方法，其特征在于所述的酸性溶液包括硫酸、鹽酸、磷酸、酒石酸、檸檬酸中的一種。