[發明專利]用于樣品中桃源性成分檢測的引物及方法和試劑盒

有效

• 申請號: 201010240517.X
• 申請日: 2010-07-30
• 公開（公告）號: CN102344953A
• 公開（公告）日: 2012-02-08
• 發明（設計）人: 黃文勝;陳穎;韓建勛;鄧婷婷;吳亞君
• 申請（專利權）人: 中國檢驗檢疫科學研究院
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;G01N21/64;C12N15/11
• 代理公司: 隆天國際知識產權代理有限公司 72003
• 代理人: 呂俊清;吳小瑛

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體而言，本發明涉及用于樣品中桃源性成分檢測的寡核苷酸引物，用于測定樣品中桃源性成分的實時熒光PCR檢測方法，用于快速檢測樣品中桃源性成分的PCR檢測試劑盒，以及樣品中桃源性成分的特異性寡核苷酸引物和探針在檢測樣品中桃源性成分中的應用。

背景技術

我國擁有豐富的水果資源，果汁加工業近年來發展迅速。隨著人們生活水平和健康意識的提高，果汁飲料產品日趨多元化，各種果汁飲料的種類、類型和品牌層出不窮。然而受經濟利益的驅使，一些不法廠商在果汁種類、含量標示上作假，使一些名不副實甚至以假充真的果汁充斥市場。這不僅直接損害了消費者的經濟利益，而且極有可能危害消費者健康，同時也侵犯了商標持有企業的合法權益，最終不僅破壞我國市場經濟秩序，導致嚴重的負面社會效應，擾亂社會誠信體系，而且影響我國商品在國際市場上的形象，損害我國進出口貿易利益。

由于桃等水果中含有一種重要的過敏源-類甜蛋白Thaumatin-LikeProtein(TLP)，目前已成為引起過敏反應的主要水果之一，并逐漸受到越來越多的關注。TLP已從多種食物中提取出來，如梨、蘋果、桃、番茄和馬鈴薯等，它是植物果實在受到病原微生物侵害時體內誘導產生的病程相關蛋白(PRs)家族的重要成員之一，參與多種抗真菌反應過程，也是部分人群的重要過敏源。目前市場上桃汁飲料中的類甜蛋白成分可能因為標識不清或摻偽造假，造成部分人群對其過敏而侵犯消費者權利。因此，果汁飲料中的過敏源成分類甜蛋白檢測具有理論和現實意義。

隨著科技的發展，桃汁及其相關飲料的摻假手段也越來越隱蔽。最初的摻假僅是加水及蔗糖和糖漿等甜味劑，現在已經發展到根據各種果汁的組成而進行非常精細的添加，甚至將食品鑒偽專家建立的果汁組成數據庫作為摻假的“配方”，使得各種傳統的桃源性成分檢測變得越來越困難。當前，急需一種能不受添加手段影響，從桃原料本質上予以檢測的鑒偽技術。

國內外關于果汁成分鑒別的研究經歷了從單一性狀、常見組分、常規分析到多性狀、特異組分、專門分析及數理統計方法運用的過程。隨著現代生物技術的發展，應用分子生物學方法進行食品鑒別正成為國際上倍受關注的研究方向。分子生物學技術以其方便、準確、迅速、簡潔的特點，從基因水平分析食品原料和產品的特性和來源，靈敏度更高、特異性更強，其結果為證明食品的真偽提供了真實、可靠的依據，給食品種類鑒別、產品溯源等食品鑒偽研究注入了新鮮血液，已成為近年來世界各國的許多機構和學者的研究方向。

而實時熒光PCR技術的誕生，彌補了常規化學檢測技術的諸多不足，為檢測技術的發展開辟了新的領域。實時熒光PCR是在PCR反應體系中加入熒光標記探針，利用熒光信號來實時監測整個PCR進程，最后通過標準曲線對模板濃度進行定量分析，使PCR技術從定性水平發展到定量水平。近幾年，在分子生物學研究中，利用定量PCR對基因表達量及轉基因產品含量進行檢測，已獲得了廣泛應用。由于其大大提高了檢測的靈敏度、特異性和精確性、并能有效減少實驗過程中產生污染的危險，目前已廣泛應用于果汁及其他食品的成分鑒別領域。

實時熒光PCR技術的誕生，彌補了常規化學檢測技術的諸多不足，為檢測技術的發展開辟了新的領域。實時熒光PCR是在PCR反應體系中加入熒光標記探針，利用熒光信號來實時監測整個PCR進程，最后通過標準曲線對模板濃度進行定量分析，使PCR技術從定性水平發展到定量水平。近幾年，在分子生物學研究中，利用定量PCR對基因表達量及轉基因產品含量進行檢測，已獲得了廣泛應用。由于其大大提高了檢測的靈敏度、特異性和精確性、并能有效地減少實驗過程中產生污染的危險，目前已廣泛應用于各個領域。

目前，國內外尚未見報道能夠快速、簡單、特異且靈敏地檢測果汁、食品、藥品以及營養品等樣品中桃源性成分的方法以及試劑盒。

因此，本領域需要一種快速、特異性好、靈敏度高的樣品中桃源性成分的檢測方法以及用于快速檢測樣品中桃源性成分的試劑盒，進行果汁、食品、藥品以及營養品等樣品中桃源性成分的檢測。

發明內容

本發明的一個目的在于，提供快速檢測樣品中桃源性成分的特異性寡核苷酸引物。

本發明的另一個目的在于，提供快速測定樣品中桃源性成分的PCR檢測方法。

本發明的再一個目的在于，提供用于快速檢測樣品中桃源性成分的PCR檢測試劑盒。

本發明的還一個目的在于，提供樣品中桃源性成分的特異性寡核苷酸引物和探針在檢測樣品中桃源性成分中的應用。

針對上述發明目的，本發明提供以下技術方案：