[發明專利]一種檢測對位紅的間接競爭法酶聯免疫試劑盒

無效

• 申請號: 201010240057.0
• 申請日: 2010-07-29
• 公開（公告）號: CN102346182A
• 公開（公告）日: 2012-02-08
• 發明（設計）人: 楊曙明;邱靜;于洪俠;陳剛;陳愛亮;張妍;程瑪麗;張薇薇
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院農業質量標準與檢測技術研究所
• 主分類號: G01N33/53
• 分類號: G01N33/53;G01N33/577;G01N21/31
• 代理公司: 北京匯澤知識產權代理有限公司 11228
• 代理人: 張瑾

技術領域

本發明屬于酶聯免疫和食品安全領域中違禁添加劑檢測分析技術領域，具體而言，本發明涉及一種用于檢測對位紅的間接競爭法酶聯免疫檢測試劑盒。

技術背景

對位紅屬于偶氮系列化工合成染色劑，主要應用于油彩顏料及橡膠制品的著色，常溫下呈固態。由于其結構(見下圖)與致癌物蘇丹紅相似，在代謝過程中偶氮苯可被降解，產生苯胺，苯胺可直接作用于肝細胞，引起中毒性肝病，長期攝入苯胺可造成人體的神經系統損害，并具有潛在的致癌性，因此被禁止用于食品生產。

由于添加對位紅后可使辣椒制品、番茄制品以及香腸等食品長期保持鮮艷光亮的櫻桃紅色，增加了產品的外觀新鮮度，而且在偶氮染料中價格相對便宜，可大幅降低生產成本，因而被不法商家作為食品添加劑使用，以吸引消費者，雖屢禁而不止，給消費者帶來巨大的危害。

(二)相關國家標準的檢測方法現狀

目前國內仍沒有針對對位紅的檢測方法標準，其日常檢測主要參考蘇丹紅的方法標準(GB/T?19681-2005)，采用溶劑萃取，液相色譜測定。國外實驗室對位紅的檢測，則常采用液相、氣相色譜法或與質譜聯用進行定性、定量。這些方法具有檢測精度高、靈敏、準確、穩定等一系列優點，但設備及檢測費用昂貴、操作復雜、分析時間長，不能實現現場檢測，限制了其推廣和應用，也給對位紅的快速檢測和監管帶來困難。目前國內外還沒有專門針對對位紅的快速免疫檢測方法報道，因而建立高靈敏度的對位紅快速檢測技術成為當務之急。

發明內容

本發明的目的在于提供一種快速檢測對位紅的酶聯免疫試劑盒。

本發明提供了一種快速檢測對位紅的酶聯免疫試劑盒，該試劑盒包括：對位紅特異性抗體、對位紅-載體蛋白偶聯物和酶標二抗。其中對位紅特異性抗體為對位紅的多克隆抗體或單克隆抗體，可用對位紅與載體蛋白偶聯物作為免疫原通過免疫動物(例如兔或鼠)制得。所述的載體蛋白為牛血清白蛋白、人血清白蛋白、卵清蛋白或匙孔銅蘭蛋白(KLH)。所述的對位紅-載體蛋白偶聯物采用化學方法偶聯得到。所述酶標二抗的標記酶為辣根過氧化物酶，所述酶標二抗可以用商品化的辣根過氧化物酶酶標二抗，也可以通過過碘酸鈉法或戊二醛法將辣根過氧化物酶與二抗偶聯制得。在本發明的一個優選實施方案中，所述酶標二抗為酶標羊抗兔IgG抗體或酶標羊抗鼠抗體。

用于制備所述酶標板的固相材料，包括但不限于，例如，聚苯乙烯、聚乙烯、聚丙烯。載體的形式是微量反應板凹孔。

為方便現場檢測和大量樣本篩查，所述試劑盒還可以進一步包括包被有對位紅抗原的酶標板、對位紅標準溶液、顯色劑、濃縮洗滌液、終止液和濃縮樣品稀釋液。

所述的濃縮洗滌液為0.5％吐溫-20?10倍磷酸鹽緩沖液。所述的顯色劑由顯色劑A液和顯色劑B液組成(例如，使用體積比為1∶1)，顯色劑A液為過氧化氫或過氧化脲，顯色劑B液為四甲基聯苯胺或鄰苯二胺。所述的濃縮樣品稀釋液為含0.1％吐溫-20的10倍磷酸鹽緩沖液。

另一方面，本發明還提供了一種檢測飼料、水產品或食品樣品中對位紅含量的方法，包括步驟：

(1)樣品前處理；

(2)用權利要求1-9任一所述的試劑盒進行檢測，向包被有對位紅抗原的酶標板孔中加入標準品或樣品溶液，再加入抗對位紅多克隆或單克隆抗體，孵育后洗滌拍干，加入酶標記二抗，孵育后洗滌拍干，顯色、終止，用酶標儀測定吸光度值；

(3)分析檢測結果。

本發明試劑盒的檢測原理為：

將對位紅抗原吸附于固相載體上，加入樣本或對位紅標準品溶液并加入對位紅抗體工作液，待測樣品中對位紅和固相載體上包被的對位紅抗原競爭對位紅抗體，再加入酶標記抗抗體進行酶活性的放大作用，顯色后終止，測定樣品的吸光度值，該值與樣品中對位紅的量呈負相關，與標準曲線比較即可得出對位紅濃度范圍。

有益效果：

本發明檢測對位紅的試劑盒主要采用間接競爭酶聯免疫吸附測定法定性或定量測定樣品中對位紅紅含量；對樣品的前處理要求低，樣品前處理過程簡單，能同時快速檢測大批樣品。

本發明中，該試劑盒采用高特異性的對位紅多克隆或單克隆抗體，主要試劑以工作液形式提供，可以減少試劑盒的操作步驟，為使用者節省時間并降低因操作步驟冗繁造成的誤差，本發明具有靈敏度高、特異性強、高精確度、高準確度、對儀器設備要求低、試劑保存時間長、自動化程度高、無放射性同位素污染的等優點，可在飼料及動物源性產品檢測中發揮重要作用。

附圖說明