[發明專利]甘藍型油菜低芥酸分子標記及其制備方法與應用

無效

• 申請號: 201010239497.4
• 申請日: 2010-07-26
• 公開（公告）號: CN101955930A
• 公開（公告）日: 2011-01-26
• 發明（設計）人: 周永明;淮東欣;楊慶勇
• 申請（專利權）人: 華中農業大學
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12N15/10;C12Q1/68
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所 42001
• 代理人: 王敏鋒

1.一種甘藍型油菜低芥酸含量的共顯性SNP分子標記，它的核苷酸序列如序列表SEQ?IDNO：5、SEQ?ID?NO：6、SEQ?ID?NO：7和SEQ?ID?NO：8所示。

2.擴增甘藍型油菜低亞麻酸含量的共顯性SNP分子標記的引物對，它的DNA序列如下所示：

引物對YQ-fae1-1：

正向引物5′-GGGCCGCTATTTTGCTATT-3′，

反向引物5′-GTGTTCCCAAGGACTATTTGAC-3′；

引物對YQ-fae1-2：

正向引物5′-GGCCGCTATTTTGCTCAC-3′，

反向引物5′-GTGTTCCCAAGGACTATTTGAC-3′；

引物對HD-fae1-1：

正向引物5′-GAGACGGAGCAAGTTATC-3′，

反向引物5′-TCCCAAGGACTATTTGGA-3′；

引物對HD-fae1-2：

正向引物5′-GAGACGGAGCAAGTTATC-3′，

反向引物5′-TCCCAAGGACTATTTGTT-3′。

3.一種甘藍型油菜低芥酸含量的共顯性SNP分子標記的制備方法，其包括以下步驟：

(1)用引物對HY-fae1：正向引物5′-CATGCCATGGATGACGTCCGTTAACGTAAAG-3′，反向引物5′-CATGGCTAGCTTAGGACCGACCGTTTTGGAC-3′分別擴增低芥酸甘藍型油菜品系甲A254和高芥酸甘藍型油菜品系4185B-2基因組DNA，獲得2個DNA片段；回收測序，獲得如序列表SEQ?ID?NO：1，SEQ?ID?NO：2，SEQ?ID?NO：3和SEQ?ID?NO：4所示的核苷酸序列；

(2)分析比較所述SEQ?ID?NO：1和SEQ?ID?NO：2所示核苷酸的差異，采用引物3’端錯配策略將正向引物和反向引物的3’端的第2位堿基同時進行錯配處理，設計得引物對YQ-fae1-1：正向引物5′-GGGCCGCTATTTTGCTATT-3′，反向引物5′-GTGTTCCCAAGGACTATTTGAC-3′，和YQ-fae1-2：正向引物5′-GGCCGCTATTTTGCTCAC-3′，反向引物5′-GTGTTCCCAAGGACTATTTGAC-3′；根據SEQ?ID?NO：3和SEQ?ID?NO：4所示核苷酸差異，設計引物對HD-fae1-1：正向引物5′-GAGACGGAGCAAGTTATC-3′，反向引物5′-TCCCAAGGACTATTTGGA-3′，和引物對HD-fae1-2：正向引物5′-GAGACGGAGCAAGTTATC-3′，反向引物5′-TCCCAAGGACTATTTGTT-3′；

(3)分別用步驟(2)所述的引物對YQ-fae1-1、引物對YQ-fae1-2、引物對HD-fae1-1、引物對HD-fae1-2在低芥酸甘藍型油菜品系甲A254和高芥酸甘藍型油菜品系4185B-2中進行PCR擴增，得到甘藍型油菜芥酸含量的共顯性SNP標記，它們的核苷酸序列如序列表SEQID?NO：5、SEQ?ID?NO：6、SEQ?ID?NO：7和SEQ?ID?NO：8所示

4.權利要求1所述的分子標記在低芥酸甘藍型油菜的輔助選擇中的應用。

5.權利要求2所述的引物對在低芥酸甘藍型油菜的輔助選擇中的應用。