[發明專利]一種重組人干擾素α2b DNA片段及編碼的蛋白質

有效

• 申請號: 201010239210.8
• 申請日: 2008-12-18
• 公開（公告）號: CN101906424A
• 公開（公告）日: 2010-12-08
• 發明（設計）人: 趙廣榮;張和平;梁玲玲;杜磊;祝琳琪
• 申請（專利權）人: 天津大學
• 主分類號: C12N15/21
• 分類號: C12N15/21;C07K14/56
• 代理公司: 天津市北洋有限責任專利代理事務所 12201
• 代理人: 陸藝

本申請是申請日為2008年12月18日，申請號為200810154234.6，發明名稱為：“重組人干擾素DNA片段及編碼的蛋白質”的分案申請。

技術領域

本發明涉及醫藥生物工程技術領域，涉及一種重組人干擾素DNA片段及編碼的蛋白質。

背景技術

干擾素α(interferon，IFNα)是一種細胞因子，具有抗腫瘤增生、抗病毒等生物活性，在炎癥、病毒和惡性腫瘤等方面具有顯著療效。采用分子生物學及DNA重組技術，已經研發上市了重組人干擾素。但是人干擾素α2b作為藥物，并沒有達到最大優化，有的人干擾素α2b其比活不夠高，也有的可溶性程度不高。人們不斷應用新方法和技術，對人干擾素α2b進行改造，試圖尋找和發現比活更高、可溶性程度較高的新型人干擾素?；蚬こ毯蚉CR方法為改造干擾素基因序列提供了有力的技術支持，用于獲得更高活性的干擾素α2b，提高療效和延長半衰期。

發明內容

本發明的目的是克服現有技術的不足，提供一種重組人干擾素α2b?DNA片段。

本發明的第二個目的是提供第二種重組人干擾素α2b?DNA片段。

本發明的第三個目的是提供第二種重組人干擾素α2b?DNA片段編碼的蛋白質。

本發明的第四個目的是提供第三種重組人干擾素α2b?DNA片段。

本發明的第五個目的是提供第三種重組人干擾素α2b?DNA片段編碼的蛋白質。

本發明的第六個目的是提供第四種重組人干擾素α2b?DNA片段。

本發明的第七個目的是提供第四種重組人干擾素α2b?DNA片段編碼的蛋白質。

本發明的技術方案概述如下：

一種重組人干擾素α2b?DNA片段，它是序列表SEQ?ID?NO.1所述的核苷酸序列。

第二種重組人干擾素α2b?DNA片段，它是序列表SEQ?ID?NO.2所述的核苷酸序列。

序列表SEQ?ID?NO.2的重組人干擾素α2b?DNA片段編碼的蛋白質，它是序列表SEQID?NO.3所述的氨基酸序列。

第三種重組人干擾素α2b?DNA片段，它是序列表SEQ?ID?NO.4所述的核苷酸序列。

序列表SEQ?ID?NO.4的重組人干擾素α2b?DNA片段編碼的蛋白質，它是序列表SEQID?NO.5所述的氨基酸序列。

第四種重組人干擾素α2b?DNA片段，它是序列表SEQ?ID?NO.6所述的核苷酸序列。

序列表SEQ?ID?NO.6的重組人干擾素α2b?DNA片段編碼的蛋白質，它是序列表SEQID?NO.7所述的氨基酸序列。

分別含有序列表SEQ?ID?NO.2、SEQ?ID?NO.4、SEQ?ID?NO.6的重組人干擾素α2b?DNA?片段的質粒，用下述兩種方法之一構建的：

第一種方法是：根據大腸桿菌EcolC1958基因序列，設計引物擴增得到產物EcolC1958，用XbaI和EcoRI雙酶切質粒pET28a和擴增產物EcolC1958，連接，構建出載體pBPE172，將含有序列表SEQ?ID?NO.2所述的核苷酸序列與載體pBPE172酶切后連接或將含有序列表SEQ?ID?NO.4所述的核苷酸序列與載體pBPE172酶切后連接或含有序列表SEQ?ID?NO.6所述的核苷酸序列與載體pBPE172酶切后連接，得到含有序列表SEQ?ID?NO.2的重組人干擾素α2b?DNA片段的質?；蚝行蛄斜鞸EQ?ID?NO.4的重組人干擾素α2bDNA片段的質?；蚝行蛄斜鞸EQ?ID?NO.6的重組人干擾素α2b?DNA片段的質粒。

第二種方法是：將含有序列表SEQ?ID?NO.2所述的核苷酸序列與載體pET?43.1a酶切后連接或將含有序列表SEQ?ID?NO.4所述的核苷酸序列與載體pET?43.1a酶切后連接或含有序列表SEQ?ID?NO.6所述的核苷酸序列與載體pET?43.1a酶切后連接，得到含有序列表SEQ?IDNO.2的重組人干擾素α2b?DNA片段的質?；蚝行蛄斜鞸EQ?ID?NO.4的重組人干擾素α2bDNA片段的質粒或含有序列表SEQ?ID?NO.6的重組人干擾素α2b?DNA片段的質粒。

本發明的重組人干擾素α2b?DNA片段編碼的蛋白質主要以可溶性方式存在，其抗病毒活性是人天然干擾素的幾十倍。其抗腫瘤活性，與人天然干擾素相比，具有較高的抗增殖活性。

附圖說明

圖1是PCR后的rh-mIFN-1片段的電泳圖。

圖2是大引物法獲得的rh-mIFN-2片段的電泳圖。