[發明專利]青錢柳酸A的制備方法

有效

• 申請號: 201010238879.5
• 申請日: 2010-07-28
• 公開（公告）號: CN101899083A
• 公開（公告）日: 2010-12-01
• 發明（設計）人: 吳彩娥;方升佐;范龔健;楊萬霞;李婷婷;徐琳
• 申請（專利權）人: 南京林業大學
• 主分類號: C07J63/00
• 分類號: C07J63/00
• 代理公司: 南京天翼專利代理有限責任公司 32112
• 代理人: 周靜

技術領域

本發明涉及一種青錢柳酸A的制備方法。

背景技術

青錢柳酸A(3，23-β-epoxy-olean-12-en-28-oic?acid)，是青錢柳特有的一種三萜類活性成分，結構如下所示：

青錢柳[Cyclocarya?paliurus(Batal)Ijinskaja]是我國特有的一種單屬種植物，極具醫療保健價值，用其葉子于配制成的降血糖茶在臨床上已使用多年。青錢柳葉中含有多糖、黃酮、三萜、甾體、酚類、內酯、香豆精等活性成分。研究表明，青錢柳提取物具有降血糖、降血壓、降血脂、抗氧化、抗菌、抗癌和增強機體免疫力等生物活性功能。青錢柳三萜類成分作為青錢柳主要生物活性成分之一，目前已取得一定的研究進展，但關于青錢柳三萜類成分的分離純化方法研究鮮見報道。且在市場上也未見青錢柳三萜單體樣品流通。因此，尋找一種更好的提取率高、成本低和易于工業化生產的青錢柳酸A分離純化工藝，能為青錢柳的特征生物活性研究奠定基礎，為構效關系的研究提供前提。

發明內容

本發明提供一種青錢柳酸A的制備方法。

所述青錢柳酸A的制備方法包括如下步驟：

①將青錢柳葉的乙醇提取物浸膏350～500g粗提物，溶于1L蒸餾水中，得到青錢柳葉粗提物水溶液；

②將上述粗提物水溶液過D101型大孔吸附樹脂柱，充分吸附后，先用3～5L蒸餾水洗脫除去部分水溶性雜質，再用1L50％乙醇洗脫，收集50％乙醇部分進行濃縮至0.1～0.2倍體積，然后用300～500ml氯仿萃取，氯仿層經旋轉蒸發濃縮至無溶劑排出，得到氯仿萃取物浸膏；

③將上述獲得的氯仿萃取物浸膏樣品10～15g用氯仿溶解，過硅膠柱，氯仿的質量體積比為2∶1～3∶2，然后用氯仿和甲醇梯度洗脫，氯仿∶甲醇＝100∶0、95∶5、90∶10、80∶20；收集氯仿∶甲醇＝90∶10洗脫部分進行濃縮干燥，得粉末0.15～0.30g，用0.5ml氯仿溶解，過硅膠柱，再用氯仿和甲醇梯度洗脫，氯仿∶甲醇＝95∶5～90∶10，收集洗脫峰，在氯仿∶甲醇＝90∶10部分獲得青錢柳酸A樣品。

青錢柳葉的乙醇提取物浸膏的制備方法為：將3～5kg青錢柳葉干燥粉碎，加入10倍重量的90％乙醇中，在50℃下浸泡5h，過濾，濾液濃縮后得到青錢柳葉乙醇提取物浸膏350～500g。

本發明的特點是：

①利用青錢柳葉為原料，制備得到青錢柳特有的三萜類物質——青錢柳酸A，對青錢柳的生物活性功能的構效關系研究意義深遠；

②將大孔樹脂用于青錢柳三萜的初步提純，使青錢柳三萜的純度大幅度提高；③通過硅膠柱層析進行反復分離純化，得到較高純度的青錢柳三萜單體樣品——青錢柳酸A。

附圖說明

圖1是實施例1所得青錢柳酸A的液相色譜圖；

圖2是實施例1所得青錢柳酸A的質譜圖。

具體實施方式

實施例1

1.以5kg青錢柳葉為原料，干燥粉碎，加入10倍重量的90％乙醇中，在50℃下浸泡5h，過濾，濾液濃縮并干燥后得到500g粗提物，溶于1L蒸餾水中，備用。

2.將上述水溶液過D101型大孔吸附樹脂柱(4.5cm×40cm)，使樹脂對提取液中的青錢柳三萜類化合物進行充分吸附：先用5L蒸餾水洗脫除去部分水溶性雜質，再用1L50％乙醇洗脫，收集50％乙醇部分進行濃縮至0.2倍體積，然后用500ml氯仿萃取，氯仿層經旋轉蒸發濃縮至無溶劑蒸發，得到氯仿萃取物浸膏245g。

3.將上述獲得的樣品10g用5ml氯仿溶解，過硅膠柱(2.5cm×40cm)，用氯仿和甲醇梯度洗脫，氯仿∶甲醇＝100∶0、95∶5、90∶10、80∶20(階段梯度)。收集氯仿∶甲醇＝90∶10洗脫部分進行濃縮干燥，得粉末0.15g，用0.5ml氯仿溶解，過硅膠柱(1.2cm×40cm)，洗脫劑梯度：氯仿∶甲醇＝95∶5～90∶10(線性梯度)，收集洗脫峰，獲得青錢柳酸A樣品54.9mg，經高效液相色譜-質譜分析(ZORBAX?SB-C₁₈色譜柱，流動相：乙腈和水，流速：0.4mL/min，檢測波長：210nm；質譜條件：電離方式：ESI(positive)；干燥氣(N₂)流速：25L·min^-1；輔助氣(N₂)流速：0.75L·min^-1；離子傳輸管溫度：300℃；離子傳輸管電壓：7V；電離電壓：4.5KV)，該樣品為青錢柳酸A，純度達95.01％。

實施例2