[發明專利]一種外生菌根輔助細菌短小芽孢桿菌及其應用

有效

• 申請號: 201010238823.X
• 申請日: 2010-07-28
• 公開（公告）號: CN101914474A
• 公開（公告）日: 2010-12-15
• 發明（設計）人: 吳小芹;盛江梅;侯亮亮;劉輝;葉建仁
• 申請（專利權）人: 南京林業大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A01N63/02;A01N63/04;A01P3/00;A01P21/00;C05F11/08;C12R1/07
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技術領域

本發明屬于微生物肥料領域，尤其涉及一種外生菌根輔助細菌短小芽孢桿菌及其在促進黑松生長和防治松苗猝倒病中的應用。

背景技術

植物根際促生細菌(Plant?growth-promoting?rhizobacteria，PGPR)是對根際微生物區系中能夠促進植物生長、防治病害、增加作物產量的細菌的統稱。自從1978年Burr等人首先在馬鈴薯上報導PGPR以來，國內外已發現20多個種屬PGPR。其中，假單胞菌屬(Pseudomonas)、芽孢桿菌屬(Bacillus)、農桿菌屬(Agrobacterium)、埃文氏菌屬(Eriwinia)、黃桿菌屬(Flavobacterium)、巴斯德氏菌屬(Pasteuria)、沙雷氏菌(Serratia)、腸桿菌(Enterobacter)等的作用最為突出。植物根際促生細菌和外生菌根真菌(Ectomycorrhizal?Fungi，EMF)作為植物根圈微生物的重要組成類群，對植物的營養吸收、生長發育及土壤結構發揮著重要的作用。國內外已有大量的研究表明，菌根真菌與PGPR混合接種對宿主植物的生長和營養吸收具有積極意義(Linderman，1996；JezaRll?et?al，2004；王新榮等，1998)。

菌根輔助細菌(Mycorrhizal?Helper?Bacteria，MHB)作為一類的特殊的PGPR，與菌根真菌的作用關系十分密切，是菌根學研究的熱點之一。MHB的概念是1994年由法國學者Garbaye提出的，具體是指可與菌根聯結并對菌根的形成具有選擇性促進作用的細菌。大量研究表明，MHB與菌根真菌雙接種可顯著促進菌根真菌孢子萌發和菌絲生長、提高菌根侵染率等，從而促進植物生長(Garbaye?et?al，1992；Duponnois?et?al，2003)。國外關于MHB與菌根真菌互作關系的研究已有幾十年的歷史，篩選出了大量的MHB，并對某些優良的MHB開展了比較深入的研究，但到目前為止，在我國還未見有關MHB的篩選研究以及MHB與菌根真菌互作的相關報道。

黑松(Pinus?thunbergii)是我國南方人工林中最主要的造林樹種之一，廣泛應用于荒山造林、沿海防護林帶的建設，且具有極強的觀賞價值。黑松是典型的外生菌根樹種，主要生長在沿海土壤瘠薄的立地上，其生長對外生菌根真菌(EMF)的依賴性很強，菌根技術的應用可以提高其在土壤貧瘠地區的生產力；而菌根輔助細菌(MHB)能通過促進菌根菌生長，從而達到更好的促進林木生長的目的。因此，研究MHB及其與菌根真菌互作對黑松的促生效果具有重要的理論和實踐意義。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種促進黑松生長和外生菌根真菌生長的短小芽孢桿菌。

本發明還要解決的一個技術問題是提供上述外生菌根輔助細菌短小芽孢桿菌的應用。

為解決上述技術問題，本發明采用的技術方案如下：

外生菌根輔助細菌短小芽孢桿菌(Bacillus?pumilus)HR10，是一種從黑松(Pinusthunbergii)和黃色須腹菌(Rhizopogen?luteous，R1)菌根共生體根際土壤中篩選獲得的對黑松和黃色須腹菌(Rl)生長具有促進作用的MHB菌株，已保藏于中國典型培養物保藏中心CCTCC，保藏號為CCTCC?NO：M?2010143，保藏日期：2010年6月12日。

CCTCC?NO：M?2010143菌株的菌學特性如下：

在TSA培養基平板，28℃培養24～36h菌落圓形、平鋪、米黃色、表面皺縮、較干、邊緣放射狀，菌體細桿狀；革蘭氏染色為陽性、3％KOH試驗陰性；芽孢中生。通過BIOLOG系統對HR10進行鑒定，該菌株在鑒定板培養16～24h時的讀數相似值(SIM值)為0.555，大于0.50，符合BIOLOG系統關于理想結果的要求，與數據庫比對結果的相似性(PROB)都為99％。利用該系統鑒定到了種，為短小芽孢桿菌(Bacillus?pumilus)。

測得16SrDNA大部分序列1409bp，具體如SEQ?ID?No：1所示。16SrDNA序列通過BLAST比對，在GenBank中找到同源性非常高的相近菌株序列。與HR10菌株相似性最高的是短小芽孢桿菌，同源性達到100％。從進化樹可以看出，HR10與短小芽孢桿菌的親緣關系較近，這與BIOLOG鑒定及BLAST的比對結果相符。

CCTCC?NO：M?2010143菌株對黑松具有促生長的作用。