[發(fā)明專利]轉(zhuǎn)cry1C基因水稻品系T1c-19的轉(zhuǎn)化體特異性PCR檢測方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010238746.8
• 申請日: 2010-07-26
• 公開（公告）號: CN101974618A
• 公開（公告）日: 2011-02-16
• 發(fā)明（設計）人: 謝家建;彭于發(fā)
• 申請（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)科學院植物保護研究所
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 北京海虹嘉誠知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11129
• 代理人: 胡敬紅

技術領域

本發(fā)明屬于生物技術領域，特別是涉及一種鑒別轉(zhuǎn)crylC基因水稻品系T1c-19的轉(zhuǎn)化體特異性PCR方法及其依賴的轉(zhuǎn)化體特異性序列。?

背景技術

水稻作為世界上超過一半人口的主食，是最重要的糧食作物之一。在過去的半個多世紀里，水稻育種取得了巨大的成功。水稻的單位產(chǎn)量實現(xiàn)了翻番，部分地方甚至提高至3倍，這為保障世界糧食安全作出了巨大的貢獻。但近十幾年來水稻的產(chǎn)量停滯不前，這一方面是由于在育種技術上沒有新的突破以及遺傳多樣性在栽培品種中的逐步變窄，另一方面也是因為頻繁發(fā)生的病蟲害以及旱災等自然災害使得水稻生產(chǎn)損失慘重。然而，世界人口的持續(xù)增長以及社會經(jīng)濟的快速發(fā)展導致對糧食的需求不斷增加。?

針對這些問題，我國學者圍繞水稻抗病蟲、抗旱、營養(yǎng)高效利用、優(yōu)質(zhì)、高產(chǎn)等五大重要性狀，利用轉(zhuǎn)基因技術這種新興的育種手段對水稻品種進行全面改良以實現(xiàn)農(nóng)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展。目前我國已經(jīng)有多個轉(zhuǎn)基因水稻品系進行了生產(chǎn)性實驗，申請生產(chǎn)應用生物安全證書。其中，華中農(nóng)業(yè)大學研發(fā)的轉(zhuǎn)crylAb/crylAc基因水稻華恢1號和Bt汕優(yōu)63的生產(chǎn)應用生物安全證書于2009年8月獲得了批準(http://www.stee.agri.gov.cn/biosafety/spxx/P020091127591594596689.pdf，審批編號：農(nóng)基安證字(2009)第072號和第73號)，成為我國首批允許商業(yè)化種植的轉(zhuǎn)基因水稻。?

使用新的Bt基因水稻是延緩昆蟲抗性產(chǎn)生，提高Bt水稻使用壽命的一種重要策略。Tang等人培育了轉(zhuǎn)人工合成的crylC基因的水稻品系T1c-19(Wei?Tang，et?al.Development?ofinsect-resistant?transgenic?indica?rice?with?a?synthetic?cryl?C*?gene.Mol?Breeding.2006，18：1-10)，其田間實驗表現(xiàn)出了對螟蟲的高度抗性，為發(fā)展Bt水稻提供了新的種質(zhì)資源材料。2006年，該品系獲準在湖北省進行環(huán)境釋放(轉(zhuǎn)CrylC基因抗蟲水稻T1c-19在湖北省的環(huán)境釋放安全審批書.農(nóng)基安審字(2006)第006號)，2009年獲準在湖北省進行生產(chǎn)性實驗(轉(zhuǎn)crylC基因抗蟲水稻T1c-19在湖北省的生產(chǎn)性試驗安全審批書.農(nóng)基安審字(2009)第006號)(http://new.croplab.org/web/detailjsp？i_＝554)。轉(zhuǎn)crylC基因抗蟲水稻T1c-19在通過生產(chǎn)性試驗獲得生產(chǎn)應用安全證書后，將可能成為我國又一個即將在生產(chǎn)上商業(yè)化種植的轉(zhuǎn)基因水?稻。?

進行轉(zhuǎn)基因成分檢測是對轉(zhuǎn)基因植物進行有效監(jiān)督管理，保障其健康發(fā)展的重要技術基礎。PCR技術是轉(zhuǎn)基因成分檢測中應用最為廣泛的技術。在應用這種技術進行轉(zhuǎn)基因作物定性檢測時，根據(jù)其擴增的靶標區(qū)域和特異性將其分為四類：一、篩選檢測，以轉(zhuǎn)基因通用的外源啟動子和終止子為靶標區(qū)域；二、基因特異性檢測，以特異的外源目的基因為靶標區(qū)域；三、構(gòu)建特異性檢測，以轉(zhuǎn)基因元件之間的特異構(gòu)建為靶標區(qū)域；四、轉(zhuǎn)化體特異性檢測，以轉(zhuǎn)化體特異性片段為靶標區(qū)域。這四類檢測方法對轉(zhuǎn)基因作物的品系檢測特異性是逐漸增加的。這四類檢測方法對轉(zhuǎn)基因作物的檢測特異性是逐漸增加的，轉(zhuǎn)化體特異性檢測是目前對轉(zhuǎn)基因品系檢測特異性最高的檢測方法，也是目前轉(zhuǎn)基因檢測中最常用的身份檢測方法，這種檢測方法甚至能夠區(qū)分同一轉(zhuǎn)化載體產(chǎn)生的不同轉(zhuǎn)化植株品系。?

目前已經(jīng)有部分專利和文獻報道了我國部分轉(zhuǎn)基因水稻品系的轉(zhuǎn)化體特異性片段序列，例如：謝家建等人于2007年和2008年分別利用TAIL-PCR、genome?walking和LD-PCR等方法獲得了轉(zhuǎn)基因水稻克螟稻、Bt汕優(yōu)63、科豐6號和科豐8號的轉(zhuǎn)化體特異性片段序列，并建立了轉(zhuǎn)化體特異性的檢測方法。然而，在對現(xiàn)有的專利和文獻的分析中發(fā)現(xiàn)，還沒有任何關于轉(zhuǎn)crylC基因水稻品系T1c-19的轉(zhuǎn)化體特異性片段序列和轉(zhuǎn)化體特異性檢測方法的文章和專利報道。?

發(fā)明內(nèi)容

針對上述領域中的空白，提供了轉(zhuǎn)crylC基因水稻品系T1c-19的轉(zhuǎn)化體特異性序列以及鑒別轉(zhuǎn)crylC基因水稻品系T1c-19的轉(zhuǎn)化體特異性PCR方法，該PCR方法能利用普通的PCR儀器、試劑快速準確鑒別出轉(zhuǎn)crylC基因水稻品系T1c-19，以及以T1c-19為親本的水稻品系。?

轉(zhuǎn)crylC基因水稻品系T1c-19轉(zhuǎn)化體特異性序列，如Seq?ID?No.1所示，其中水稻基因組序列為1-840bp，轉(zhuǎn)化載體序列位于841-1276bp。?