[發(fā)明專利]一種具己糖激酶抑制作用的活性成分的篩選方法無效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201010238510.4 | 申請日： | 2010-07-26 |
| 公開（公告）號： | CN102335221A | 公開（公告）日： | 2012-02-01 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 郁韻秋;潘樂 | 申請（專利權(quán)）人： | 復(fù)旦大學(xué) |
| 主分類號： | A61K36/42 | 分類號： | A61K36/42;G01N30/02;G01N30/72;A61P35/00 |
| 代理公司： | 上海正旦專利代理有限公司 31200 | 代理人： | 吳桂琴 |
| 地址： | 20043*** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 具己糖 激酶 抑制 作用 活性 成分 篩選 方法 | ||
1.一種具己糖激酶抑制作用的中藥活性成分的篩選方法，其特征在于，以ATP為底物的己糖激酶催化反應(yīng)，通過對ATP以及產(chǎn)物ADP的定量分析，篩選出中藥材中具己糖激酶抑制作用的活性組分，其包括步驟：
(1)建立高效液相-質(zhì)譜聯(lián)用方法(LC-MS)，
在流動相中添加5mM的醋酸銨，對ATP以及產(chǎn)物ADP檢測及定量分析；
(2)基于高效液相-質(zhì)譜聯(lián)用方法對ATP進行定量分析，測定以ATP作為底物的己糖激酶活性；
(3)對篩選得到的具己糖激酶抑制劑活性的中藥提取物進行測定及計算。
2.按權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(1)中對極性分子ATP的最低定量限為5μg/mL。
3.按權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(1)中，流動相添加5mM的醋酸銨，以質(zhì)譜為檢測器，毛細管電壓設(shè)置為3000V，監(jiān)測離子分別是ATP：m/z?508，ADP：m/z?428。
4.按權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(1)中，對ATP以及產(chǎn)物ADP檢測及定量分析：
色譜柱：Agilent?Extend?C-18(3.1×100mm，3μm；Agilent，Palo?Alto，CA，USA)；流動相：5mM乙酸銨(pH7.5)∶甲醇＝6∶4；流速：0.3mL/min；柱溫：20℃；進樣量：10μL；
離子源：液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用接口：電噴霧接口(ESI)，正離子模式(positive?ion)；干燥氣流速：10mL/min；干燥氣溫度：300℃；霧化氣壓力：30psi(上限60psi)；毛細管電壓：3000V；質(zhì)量分析器：檢測方式：選擇離子監(jiān)測(SIM)；檢測區(qū)間：0-1.6min；碎片電壓：100V；監(jiān)測離子：ATP，準分子離子峰(m/z?508)；ADP，準分子離子峰(m/z428)。
5.按權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(3)中，中藥提取物為中藥材木鱉子的四種提取物MBZA，MBZB，MBZC和MBZD。
6.按權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(3)中，對篩選得到的具己糖激酶抑制劑活性的中藥提取物MBZA進行測定及計算。
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