[發明專利]使褪色的病理HE切片恢復顏色的方法

無效

• 申請號: 201010238144.2
• 申請日: 2010-07-27
• 公開（公告）號: CN101923019A
• 公開（公告）日: 2010-12-22
• 發明（設計）人: 瞿智玲;倪娟;敖啟林;蘇鐵芬
• 申請（專利權）人: 華中科技大學
• 主分類號: G01N1/30
• 分類號: G01N1/30
• 代理公司: 華中科技大學專利中心 42201
• 代理人: 夏惠忠

技術領域

本發明屬于生物組織染色技術，涉及病理HE染色技術，尤其涉及使褪色的病理HE切片恢復顏色的方法。

背景技術

病理學教學包括理論教學和實習教學兩大部分，二者在教學中的作用相輔相成，平分秋色。在病理學實習教學中，病理常規HE切片是重要的教學工具。對病理學教學切片要求所選病例典型，組織切片應完整、無皺褶、無摺疊、無破損，并且切片染色鮮艷，紅藍對比鮮明，這樣的教學切片才能發揮其在教學實踐活動中應起的作用。但是，我系的教學切片大多來源于上世紀六、七十年代的尸檢標本。隨著時間的推移，由于切片的年代久遠，在實踐中，我們發現一些罕見、少見病例及一些典型的普通疾病病例的病理教學切片褪色，其中主要是蘇木素顏色的減退，有的切片的蘇木素染色甚至完全褪色，整張切片呈現一片紅色，可想而知，這樣的切片能有怎樣的教學效果。而且，由于現代醫療水平的整體提高和科技的進步，一些普通疾病得到治愈，這種病例標本難以獲得，而一些罕見、少見病例的標本已經很難，甚至不可能得到新的標本。探索一種促染方法，改善褪色教學切片的顏色，恢復其鮮艷的紅藍對比顏色，使其發揮正常的教學作用，是本領域面臨的一項重要課題。

發明內容

本發明的任務是提供一種使褪色的病理HE切片恢復顏色的方法。

實現本發明任務的技術方案是：

本發明提供的使褪色的病理HE切片恢復顏色的方法，包括以下步驟：

步驟一：用二甲苯溶解褪色的病理HE切片上的封片膠；

步驟二：依次用無水酒精和95％酒精浸泡切片以置換切片組織中的二甲苯，然后用自來水沖洗切片；

步驟三：將切片置于枸櫞酸溶液中浸泡作染色前預處理，然后再用自來水沖洗切片；

步驟四：對切片進行常規HE染色。

步驟一所述的用二甲苯溶解褪色的病理HE切片上的封片膠的具體方法是：將褪色的病理HE切片浸泡于二甲苯中，3～4天后，去除蓋玻片，如果有標簽紙，同時去除標簽紙，再在二甲苯中繼續浸泡一天。

步驟二所述的依次用無水酒精和95％酒精浸泡切片以置換切片組織中的二甲苯，然后用自來水沖洗切片的具體方法是：將切片置于無水酒精中浸泡2小時，取出切片放入新的無水酒精中繼續浸泡30分鐘，將切片取出后再放入95％酒精中浸泡10分鐘，然后用自來水沖洗切片。

步驟三所述的將切片置于枸櫞酸溶液中浸泡作染色前預處理，然后再用自來水沖洗切片的具體方法是；將切片置于0.08％枸櫞酸溶液中浸泡10-20分鐘，然后將切片取出用自來水沖洗10-20分鐘。

步驟四所述的對切片進行常規HE染色的具體方法是：將切片在蘇木素染色液中浸泡10分鐘，取出切片，用自來水沖洗，然后用1％鹽酸酒精分化，再用自來水沖洗；然后將切片浸泡于0.5％氨水中30秒鐘返藍，用自來水沖洗切片，再將切片于0.5％水伊紅染色液中浸泡5分鐘，用自來水洗切片，然后將切片浸泡于無水酒精中2分種；取出切片，將其浸泡于新的無水酒精中1分鐘；取出切片，將該切片置于新的無水酒精中浸泡1min；取出切片，再將該切片浸泡于二甲苯透明劑中2～5分鐘，然后取出切片，置于通風櫥中晾干，用中性樹膠封片。

其中所述的用1％鹽酸酒精分化的具體方法是：將切片在1％鹽酸酒精溶液中浸泡30秒鐘至1分種，褪去蘇木素不應著色部分的顏色，使本來蘇木素應該著色的成分更清晰；其中所述的將切片于0.5％水伊紅染色液中浸泡5分鐘后用自來水洗切片的具體方法是：將切片連同染色架在自來水中提拉數次，每次1至3秒鐘。

實驗資料

材料和方法

1.材料

1.1篩選褪色教學切片：急性肺淤血、腎炎褪色切片，見圖1和圖2。

1.2試劑配制

1.2.1Harris蘇木素配制：

甲液：蘇木素(Hematoylin)???????1g

無水酒精???????????????????????10ml

乙液：硫酸鋁鉀?????????????????20g

蒸餾水?????????????????????????200ml

將甲、乙兩液分別充分溶解(溶解硫酸鋁鉀時需要加熱處理)，然后混合煮沸，緩慢加入氧化汞并攪拌以加速散熱，注意：氧化汞加入后，會出現冒泡現象，此時注意防止液體溢出，隨即放入冷水浴中冷卻，恢復至室溫后過濾備用。使用前每100ml染液中加入4ml冰醋酸。

1.2.20.08％枸櫞酸：稱取枸櫞酸0.8g溶于1000ml蒸餾水中，完全溶解即可使用。