[發明專利]一種口服免疫阻斷雞肌抑素作用的轉化子及其應用

無效

• 申請號: 201010238116.0
• 申請日: 2010-07-27
• 公開（公告）號: CN101906395A
• 公開（公告）日: 2010-12-08
• 發明（設計）人: 牛冬
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;A61K39/00;A61K35/74;A61P43/00;C12R1/01
• 代理公司: 杭州天勤知識產權代理有限公司 33224
• 代理人: 胡紅娟

技術領域

本發明涉及生物工程領域，尤其涉及一種口服免疫阻斷雞肌抑素作用的轉化子及其應用。

背景技術

禽產品是人類主要動物性食品之一。隨著人們生活水平的不斷提高，市場對禽產品的需求日益增加。我國是個多禽種國家，地方雞種資源十分豐富，我國的這些品種與國外培育出的一些“專用家禽品種”相比，具有對周圍環境的高度適應性、耐粗放管理、抗病性強、肉及蛋的品質好等特點。然而由于地方雞種生長慢、飼料利用率低，產蛋量少，再加上外來高生產性能品種的引進，使許多地方雞種由于市場競爭而逐步減少甚至瀕危或滅絕。外來品種雖然生長快、飼料利用率高，但肉及蛋的品質差。隨著生活水平的提高，人們已越來越注重禽產品的品質，目前市場對高品質土雞蛋及肉產品的需求量迅猛增長，這種轉變給我們提出了培育肉蛋品質好的新品種、品系的要求和挑戰。

提高動物生產性能一直是動物生產研究人員所努力的目標。但目前通過傳統的遺傳改良和營養調控手段來提高動物產肉率已很難再有大的進展。因而研究一種安全、高效、對人類無毒副作用的提高動物產肉率的制劑或產品是目前養殖業所面臨的迫切問題。

動物的生產性狀總是由促進和抑制兩類激素或因子聯合控制的。如果把免疫學的方法應用于動物生產性能的調控，選擇對動物產肉率有抑制作用的激素或因子作為抗原來免疫動物，可誘發機體產生對抗該種激素或因子的抗體，從而抑制或減弱該激素或因子的生理功能，進而提高動物的產肉率。該技術對那些產肉率低的地方品種意義尤其重大，且十分安全無任何副作用。

由于大腸桿菌、酵母菌等不能在動物腸道中定植，所以不能進行口服免疫，必須將所表達的目的產物純化進行注射免疫。蛋白純化步驟大大增加了生產的成本和難度，使大規模生產目的蛋白制劑難以實現。同時注射免疫程序也較繁瑣，不僅要耗費較大人力，對動物的應激和傷害也較大。因此迫切需要研制出一種對動物產肉率起促進作用的安全、方便并能進行大規模生產的口服制劑。

乳酸菌是一類在食品中應用最廣泛的重要工業菌株，它包括乳酸乳球菌、乳酸桿菌等十幾個屬，被公認為是安全的食品級微生物。乳酸菌本身就是一種益生菌，能調節腸道微環境，幫助消化，抑制腸道有害微生物，防治腹瀉，促動物生長增重。

發明內容

本發明提供了一種口服免疫阻斷雞肌抑素作用的轉化子，該轉化子可以通過口服方式攝入并定植在雞腸道內，其分泌的融合蛋白能有效誘發雞體內產生抗雞肌抑素的抗體，從而抑制或減弱內源肌抑素對雞產肉性能的抑制作用。

一種轉化子，包括受體菌和轉化到受體菌內部的重組載體，所述的受體菌為乳酸乳球菌NZ9800，重組載體的原始載體為pNZ8112，重組載體的外源目的基因包括雞肌抑素基因、霍亂毒素B亞基基因以及細胞壁錨定子M6基因。雞肌抑素(Myostatin，MSTN，GenBank號：NM?001001461)又稱GDF-8(Growth?Differentiation?Factor?8，生長分化因子8)，屬于TGF-β超家族，其僅在骨骼肌中特異表達并分泌至血漿中，是影響骨骼肌生長發育的抑制因子。該基因的敲除使小鼠的骨骼肌增加了近3倍。該基因天然缺失的比利時藍牛被稱為“雙肌牛”。MSTN基因的缺失或阻斷只影響骨骼肌的發育，對心肌、平滑肌等沒有任何影響，不對動物的其它性能產生危害，牛自然狀態下的雙肌現象證明了這一點。在本發明中它作為免疫原。

為了增強機體免疫應答，提高免疫效果，在抗原基因上連接霍亂毒素B亞基基因，霍亂毒素B亞基(Cholera?toxin?B?subunit，簡稱CTB，GenBank號：U25679)為免疫增強子，研究表明它是一種無毒性的非常有效的黏膜免疫佐劑，特別適合作為口服疫苗的免疫增強佐劑蛋白。

細胞壁錨定子M6(GenBank號：M11338)可與乳酸乳球菌細胞膜上的蛋白相結合，免疫原和免疫增強子被表達后分泌到胞外，通過細胞壁錨定子M6能夠固定在細胞壁上。

原始載體pNZ8112含有強啟動子即乳鏈菌肽A(Nisin?A)的啟動子NisA(GenBank號：AY303241)以及高效分泌型信號肽Usp45(GenBank號：M60178)，信號肽Usp45位于啟動子NisA的下游，外源目的基因連接在信號肽的C端。

所述的肌抑素基因、霍亂毒素B亞基基因、細胞壁錨定子M6基因、啟動子NisA和信號肽Usp45的堿基序列如SEQ?ID?NO.7～11所示。