[發明專利]乳酸菌的培養方法

無效

• 申請號: 201010237935.3
• 申請日: 2010-07-27
• 公開（公告）號: CN102337230A
• 公開（公告）日: 2012-02-01
• 發明（設計）人: 郭景鵬;沙飛翔;丁國才
• 申請（專利權）人: 上海海帝園藝有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12R1/245;C12R1/25;C12R1/01
• 代理公司: 上海漢聲知識產權代理有限公司 31236
• 代理人: 郭國中

技術領域

本發明屬于微生物技術領域，具體涉及一種乳酸菌的培養方法。

背景技術

乳酸菌指發酵糖類主要產物為乳酸的一類無芽孢、革蘭氏染色陽性細菌的總稱。能從葡萄糖或乳糖的發酵過程中產生乳酸的細菌統稱為乳酸菌。青貯飼料是將含水率為65％～75％的青綠飼料經切碎后，在密閉缺氧的條件下，通過厭氧乳酸菌的發酵作用，抑制各種雜菌的繁殖而得到的一種粗飼料。青貯飼料氣味酸香、柔軟多汁、適口性好、營養豐富、利于長期保存.是家畜優良飼料來源。乳酸菌是在青貯發酵過程中占主導地位的微生物，乳酸菌發酵可產生大量的乳酸來降低飼料的pH值，抑制其中有害微生物(主要為酵母菌)的生長，從而使得青貯飼料得到長期保持。乳酸菌多數屬于厭氧菌體或微好氧菌體，在普通培養條件下，乳酸菌均菌體生長十分緩慢，甚至不能生長，這給乳酸菌的利用帶來了一定的困難，同時也使得采用發酵法生產的青貯飼料品質難以得到進一步提高。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術中乳酸菌培養方法中乳酸菌生產緩慢，效率不高，利用其制備的青貯飼料品質低下的技術問題。

本發明涉及的乳酸菌的培養方法包括如下步驟：采用涂布法將菌種接種至MRS培養基上，之后進行厭氧培養。

優選地，所述乳酸菌為布氏乳桿菌(Lactobacillus?casei)、植物乳桿菌(Lactobacillus?plantarum)或戊糖片球菌(Pediococcuspentosaceus)。

優選地，所述乳酸菌為植物乳桿菌(Lactobacillus?plantarum)。

優選地，所述厭氧培養的溫度為37℃。

本發明具有如下的有益效果：本發明的方法培養的乳酸菌菌落較多且個體較大，利用本發明培養的乳酸菌可制備高品質的青貯飼料。

具體實施方式

以下結合具體實施例，對本發明作進一步說明。應理解，以下實施例僅用于說明本發明而非用于限定本發明的范圍。

本發明涉及的布氏乳桿菌(Lactobacillus?casei)、植物乳桿菌(Lac?tobacillus?plantarum)、戊糖片球菌(Pediococcus?pentosaceus)已在名為《傅彤；微生物接種劑對玉米青貯飼料發酵進程及其品質的影響[D]；中國農業科學院；2005年》的碩士論文中公開；

本發明涉及的MRS培養基已在《黃良昌，呂曉玲.保加利亞乳桿菌濃縮培養的研究[J].中國乳品工業，2002，30(1)：12-15》中公開。

實施例

1、采用涂布法將菌種接種至MRS培養基上

(1)稱取新鮮的玉米植株25g，裝入盛有225ml滅菌生理鹽水的三角瓶內，加少量玻璃珠搖床震蕩30min；

(2)用滅菌吸管吸取1ml上述液體，緩緩注入到含有9ml滅菌生理鹽水的試管內；

(3)另取一支滅菌吸管，按上述操作順序，作10倍遞增稀釋液體，如此每遞增一次，即換用1支滅菌吸管；

(4)從以上方法培養出的菌落中，用釣菌環分別釣取一個戊糖片球菌(Pediococcus?pentosaceus)菌落、植物乳桿菌(Lactobacillusplantarum)菌落、布氏乳桿菌(Lactobacillus?casei)菌落，然后分別倍比稀釋到10^-6、10^-5、10^-4、10^-3；

(5)用移液槍從各個稀釋梯度中分別吸取0.1ml置于倒好的MRS培養基上，用刮鏟涂布均勻，每個稀釋度做5個重復。

2、厭氧培養

翻轉平板，置37℃溫箱內培養72h，取出觀察乳酸菌菌落特征。選取菌落數目在30～300的平板進行計數，結果見表1。由表1可以看出，戊糖片球菌(Pediococcus?pentosaceus)培養72小時后，菌落數目可達163.6CFU/g，菌落大小可達1.25mm；植物乳桿菌(Lactobacillus?plantarum)培養72小時后，菌落數目可達105.2CFU/g，菌落大小可達2.06mm；布氏乳桿菌(Lactobacillus?casei)培養72小時后，菌落數目可達242CFU/g，菌落大小可達2.42mm；可見，利用本實施例的方法培養的乳酸菌菌落較多且個體較大，培養效果較好。

表1

3、制備青貯飼料