[發明專利]珍珠蚌銅鋅超氧化物歧化酶的制備方法無效
| 申請號： | 201010237912.2 | 申請日： | 2010-07-27 |
| 公開（公告）號： | CN101921786A | 公開（公告）日： | 2010-12-22 |
| 發明（設計）人： | 文春根;胡寶慶;范小勇;徐歡歡 | 申請（專利權）人： | 南昌大學 |
| 主分類號： | C12N15/53 | 分類號： | C12N15/53;C12N15/70;C12N9/08 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 330000 江西省*** | 國省代碼： | 江西;36 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 珍珠 蚌銅鋅 超氧化物歧化酶 制備 方法 | ||
【權利要求書】：
1.一種珍珠蚌銅鋅超氧化物歧化酶的制備方法，包括從生物組織或血細胞中提取總RNA，克隆銅鋅超氧化物歧化酶基因，將酶基因與原核表達質粒連接，轉化大腸桿菌，通過篩選得到工程菌，將工程菌高密度培養，通過誘導，純化得到銅鋅超氧化物歧化酶，其特征在于：
(1)從健康的褶紋冠蚌組織或血細胞中提取總RNA，反轉錄成cDNA后用表達引物SODFb：5′-AAG?GGT?ACC?ATG?TCC?ATT?AAG?GCT?GTT?TGC?G-3′，SODRb：5′-GGA?GAATTC?TCA?ATC?CAA?TTT?TGA?AAT?TCC-3′對銅鋅超氧化物歧化酶基因進行PCR擴增；
(2)選用PET30原核表達質粒與目的基因連接；
(3)用卡那霉素LB培養基對重組菌進行篩選；
(4)在誘導過程中，培養基內添加Cu2+離子和Zn2+離子，誘導溫度為20℃-25℃；
(5)通過鎳離子親和柱層析對產物進行純化；
(6)用聚乙二醇8000對蛋白進行濃縮。
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