[發(fā)明專(zhuān)利]一種同步檢測(cè)血清樣本中多種抗體的蛋白懸浮芯片及其制備方法和使用方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201010235680.7
• 申請(qǐng)日: 2010-07-23
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101936989A
• 公開(kāi)（公告）日: 2011-01-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王靜;楊永莉;楊宇;孫肖紅;曹曉梅;張曉龍
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 中國(guó)檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院
• 主分類(lèi)號(hào): G01N33/543
• 分類(lèi)號(hào): G01N33/543;G01N21/64
• 代理公司: 北京中創(chuàng)陽(yáng)光知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司 11003
• 代理人: 尹振啟

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種同步檢測(cè)血清樣本中西尼羅抗體、土拉抗體、登革熱抗體、禽流感抗體的蛋白懸浮芯片及其制備方法和使用方法。?

背景技術(shù)

西尼羅熱是由西尼羅病毒感染引起的急性傳染病。人感染西尼羅病毒多數(shù)表現(xiàn)為隱性感染，約140～300個(gè)感染者中有1個(gè)臨床病例。其癥狀為突然發(fā)熱、頭痛、背痛、肌肉痛等。發(fā)燒可表現(xiàn)為雙波熱，約半數(shù)病人可見(jiàn)皮疹。出疹時(shí)間在發(fā)熱期或發(fā)熱末期。皮疹可為玫瑰樣疹或斑丘疹，部位主要在頸背和上肢，持續(xù)時(shí)間約為1周。可見(jiàn)咽炎和惡心、嘔吐、腹瀉、腹痛等胃腸道癥狀。病程一般為3～6天，然后迅速恢復(fù)，預(yù)后良好，少數(shù)病人特別是老年人可表現(xiàn)為無(wú)菌性腦膜炎或腦膜腦炎，伴有頸強(qiáng)直、嘔吐、神志不安、嗜睡、四肢發(fā)抖、痙攣、局部麻痹和昏迷等，病死率較高，達(dá)5～12％。?

土拉菌病是由土拉弗朗西斯菌引起的多種野生動(dòng)物、家畜及人共患病，亦稱(chēng)野兔熱。臨床上以體溫升高、淋巴結(jié)腫大、脾和其他內(nèi)臟壞死為特征，土拉菌可以被用作生物戰(zhàn)中的致病病菌，感染者會(huì)出現(xiàn)高燒、渾身疼痛、腺體腫大和咽食困難等癥狀。?

登革熱是登革熱病毒引起、依蚊傳播的一種急性傳染病。臨床特征為起病急驟，高熱，全身肌肉、骨髓及關(guān)節(jié)痛，極度疲乏，部分患可有皮疹、出血傾向和淋巴結(jié)腫大。?

禽流感是由禽流感病毒引起的一種急性傳染病，也能感染人類(lèi)，人感染后的癥狀主要表現(xiàn)為高熱、咳嗽、流涕、肌痛等，多數(shù)伴有嚴(yán)重的肺炎，嚴(yán)重者心、腎等多種臟器衰竭導(dǎo)致死亡，病死率很高，通常人感染禽流感死亡率約為百分之33。此病可通過(guò)消化道、呼吸道、皮膚損傷和眼結(jié)膜等多種途徑傳播，區(qū)域間的人員和車(chē)輛往來(lái)是傳播本病的重要途徑。?

免疫學(xué)方法酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)(ELISA)中利用抗原與抗體特異性反應(yīng)來(lái)檢測(cè)抗原或抗體主要有由雙抗原夾心測(cè)抗體、雙抗體夾心測(cè)抗原、競(jìng)爭(zhēng)法、間接法等。間接法測(cè)抗體的原理是特異性抗原結(jié)合到固相載體上，?然后和待檢血清中的相應(yīng)抗體結(jié)合形成免疫復(fù)合物，洗滌后再加酶標(biāo)記二抗與免疫復(fù)合物中的抗體結(jié)合形成酶標(biāo)記二抗-抗體-固相抗原復(fù)合物，加底物顯色，判斷抗體含量。?

懸浮芯片(suspension?array)也稱(chēng)液相芯片，是20世紀(jì)70年代美國(guó)Luminex公司研制出的新一代生物芯片技術(shù)，利用帶編碼的微球體作為載體，流式細(xì)胞儀作為檢測(cè)平臺(tái)，對(duì)核酸、蛋白質(zhì)等生物分子進(jìn)行大規(guī)模測(cè)定。目前，該技術(shù)已廣泛應(yīng)用于免疫分析、核酸研究、酶學(xué)分析、抗體篩選及受體與配體的識(shí)別分析等領(lǐng)域。?

目前發(fā)展的懸浮芯片主要是基于實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法的建立和方法評(píng)價(jià)及優(yōu)化，以縮短檢測(cè)時(shí)間，降低檢測(cè)成本。但是懸浮芯片方法是否能夠同步檢測(cè)人血清中的西尼羅抗體、土拉抗體、登革熱抗體、禽流感抗體，其定量檢測(cè)能力如何，尚缺乏模型和評(píng)價(jià)。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種同步檢測(cè)血清中西尼羅抗體、土拉抗體、登革熱抗體、禽流感抗體的蛋白懸浮芯片，該芯片包括：包被有捕獲抗原的編碼微球，作為捕獲抗原的有西尼羅E蛋白、土拉fopA蛋白、登革熱E2蛋白、禽流感H5蛋白，生物素標(biāo)記的二抗和SPA作為捕獲抗體，鏈親和素-藻紅蛋白及相關(guān)緩沖溶液。?

本發(fā)明提供上述檢測(cè)西尼羅抗體、土拉抗體、登革熱抗體、禽流感抗體的蛋白懸浮芯片的制備方法，其特征在于，在相關(guān)緩沖溶液中，025號(hào)編碼微球用西尼羅E蛋白抗原包被、028號(hào)編碼微球用土拉fopA蛋白抗原包被、031號(hào)編碼微球用登革熱E2蛋白抗原包被、032號(hào)編碼微球用禽流感H5蛋白抗原包被，用生物素標(biāo)記的二抗為羊抗兔IgG或/和Biotin-SPA，用鏈親和素-藻紅蛋白(SA-PE)作為信號(hào)檢測(cè)物，所述編碼微球優(yōu)選025、028、031、032號(hào)編碼微球。?