[發明專利]一種檢測血清樣本中西尼羅抗體的蛋白懸浮芯片及其制備方法和使用方法

無效

• 申請號: 201010235661.4
• 申請日: 2010-07-23
• 公開（公告）號: CN101936988A
• 公開（公告）日: 2011-01-05
• 發明（設計）人: 王靜;楊永莉;孫肖紅;楊宇;胡孔新;姚李四
• 申請（專利權）人: 中國檢驗檢疫科學研究院
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543;G01N21/64
• 代理公司: 北京中創陽光知識產權代理有限責任公司 11003
• 代理人: 尹振啟

1.一種檢測血清樣本中西尼羅抗體的蛋白懸浮芯片，其特征在于，該芯片包括：編碼微球，作為包被編碼微球抗原的西尼羅E蛋白，生物素標記的二抗和SPA作為檢測物，鏈親和素-藻紅蛋白和相關緩沖溶液。

2.一種檢測西尼羅抗體的蛋白懸浮芯片的制備方法，其特征在于，該方法具體為：在相關緩沖溶液中，編碼微球用西尼羅E蛋白抗原包被，用生物素標記的檢測物為羊抗兔IgG或/和Biotin-SPA、用鏈親和素-藻紅蛋白作為信號檢測物。

3.如權利要求2所述的檢測西尼羅抗體的蛋白懸浮芯片的制備方法，其特征在于，所述編碼微球優選為025號編碼微球。

4.一種采用蛋白懸浮芯片檢測血清樣本中西尼羅抗體的間接免疫學檢測方法，其特征在于，該方法包括下列步驟：

1)將西尼羅E蛋白抗原作為捕獲抗原來包被編碼微球；

2)向檢測載體內加入含已包被捕獲抗原編碼微球的工作溶液，用清洗液清洗；

3)加入待測血清樣品，孵育后清洗；

4)加入用生物素標記的二抗，孵育后清洗；

5)加入鏈親和素-藻紅蛋白，孵育后清洗；

6)加入檢測緩沖液后混合均勻；

7)用懸浮芯片系統讀取平均熒光強度數值并分析數據判定檢測結果。

5.如權利要求4所述的檢測方法，其特征在于，采用生物素標記的SPA作為檢測物，并且其與西尼羅E蛋白組合組成間接法檢測體系。

6.如權利要求4所述的檢測方法，其特征在于，所述步驟1)中包被所述編碼微球的西尼羅E蛋白抗原用量為0.1～240μg/1.25×10⁶個編碼微球或0.02～960ng/2500～5000個微球/測試。

7.一種采用蛋白懸浮芯片定量檢測血清樣本中西尼羅抗體的方法，其特征在于，該方法包括下列步驟：

1)加入的陽性檢測樣品或標準品經梯度倍比稀釋；

2)將系列稀釋樣品在懸浮芯片系統中檢測讀取對應熒光值；

3)制作樣品濃度對應熒光值的劑量-反應曲線；

4)用分析軟件擬合劑量-反應曲線和方程；

5)根據劑量-反應曲線判定動態檢測范圍，根據劑量-反應方程判斷樣本中西尼羅抗體的濃度。

8.如權利要求7所述的方法，其特征在于，所述步驟1)中梯度倍比稀釋為4倍。

9.如權利要求7所述的方法，其特征在于，所述步驟1)中加入的陽性檢測樣品為兔抗西尼羅抗體。

10.如權利要求7所述的方法，其特征在于，所述步驟2)中采用2mg/mL生物素化的檢測抗體Bio-羊抗兔抗體以1∶500稀釋作為檢測物進行檢測。