[發(fā)明專利]β-興奮劑萊克多巴胺、沙丁胺醇二元檢測(cè)測(cè)試條及其制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201010235592.7
• 申請(qǐng)日: 2010-07-26
• 公開（公告）號(hào): CN101915842A
• 公開（公告）日: 2010-12-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王玉金;楊書豪;劉麗
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 河南省科學(xué)院生物研究所有限責(zé)任公司
• 主分類號(hào): G01N33/577
• 分類號(hào): G01N33/577;G01N33/543;G01N33/531;G01N21/33;G01N33/52
• 代理公司: 鄭州天陽專利事務(wù)所(普通合伙) 41113
• 代理人: 聶孟民

1.一種β-興奮劑萊克多巴胺、沙丁胺醇二元檢測(cè)測(cè)試條，包括基材PVC板和覆膜，其特征在于，基材PVC板(1)上面自前向后依次設(shè)置有引水玻璃纖維(3)、載體玻璃纖維(4)、硝酸纖維膜(2)和吸水棉漿板(5)，引水玻璃纖維、載體玻璃纖維和吸水棉漿板上面覆蓋有由前部覆蓋膜(7)和后部覆蓋膜(6)組成的覆膜，載體玻璃纖維內(nèi)吸附有抗萊克多巴胺蛋白質(zhì)偶聯(lián)物單克隆抗體和抗沙丁胺醇蛋白質(zhì)偶聯(lián)物單克隆抗體膠體金標(biāo)記物，硝酸纖維膜上包被有一條質(zhì)控線和兩條測(cè)試線，質(zhì)控線包被有兔抗鼠多抗，測(cè)試線包被有萊克多巴胺蛋白質(zhì)偶聯(lián)物、沙丁胺醇蛋白質(zhì)偶聯(lián)物；硝酸纖維膜兩端分別與載體玻璃纖維后端面和吸水棉漿板前端面緊密接觸，載體玻璃纖維前端面和引水玻璃纖維后端面緊密接觸。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的β-興奮劑萊克多巴胺、沙丁胺醇二元檢測(cè)測(cè)試條，其特征在于，所說的覆膜為不干膠膜。

3.權(quán)利要求1所述β-興奮劑萊克多巴胺、沙丁胺醇二元檢測(cè)測(cè)試條的制備方法，其特征在于，由以下步驟實(shí)現(xiàn)：

(1)膠體金標(biāo)記單克隆抗體的制備：取1份含有抗萊克多巴胺蛋白質(zhì)偶聯(lián)物或抗沙丁胺醇蛋白質(zhì)偶聯(lián)物單克隆抗體的小鼠腹水與2份60mM醋酸緩沖液混合，在18-25℃攪拌下逐滴加入辛酸33μl/ml小鼠腹水，混勻后，18-25℃放置30分鐘，15000轉(zhuǎn)/分4℃離心20分鐘，用玻璃棉過濾上清液，棄沉淀物，過濾后的上清液用NaOH調(diào)PH值至7.2，在上清液中加入硫酸銨，其加入量為每1ml?PH值7.2的上清液中加入0.277g，快速使硫酸銨溶解，于18-25℃攪拌30分鐘，15000轉(zhuǎn)/分4℃離心20分鐘，棄上清液，沉淀物用原小鼠腹水1/2體積的0.01M?PBS?pH?7.2溶液溶解，再放入0.01M?PBS?pH?7.2溶液中浸沒，4℃透析48小時(shí)，用紫外分光光度計(jì)測(cè)定膠體金標(biāo)記物蛋白含量，即制備成膠體金標(biāo)記用的抗萊克多巴胺蛋白質(zhì)偶聯(lián)物單克隆抗體、抗沙丁胺醇蛋白質(zhì)偶聯(lián)物單克隆抗體；所說的小鼠腹水，其制備方法是，將液體石蠟注射7周齡Balb/c小鼠腹腔內(nèi)，注射量為500μl/只，10天后，將分泌抗萊克多巴胺蛋白質(zhì)偶聯(lián)物或抗沙丁胺醇蛋白質(zhì)偶聯(lián)物單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞注射到小鼠腹腔內(nèi)，注射雜交瘤細(xì)胞的數(shù)量為2×10⁶/只鼠，10天后用無菌注射器注射于小鼠腹腔采集腹水，即為抗萊克多巴胺蛋白質(zhì)偶聯(lián)物或抗沙丁胺醇蛋白質(zhì)偶聯(lián)物單克隆抗體的小鼠腹水；

(2)制備膠體金溶液：在燒杯中加入1000ml蒸餾水，100℃煮沸5分鐘，再加入質(zhì)量濃度為1％的氯金酸溶液10ml和質(zhì)量濃度為1％的檸檬酸三鈉溶液15～20ml，攪拌至溶液呈深紅色，冷至18-25℃，用碳酸鉀調(diào)PH值至待標(biāo)記單克隆抗體的等電點(diǎn)或略偏堿，即為待標(biāo)記的膠體金溶液；

(3)膠體金標(biāo)記物的制備：取100ml步驟2中調(diào)好PH的膠體金溶液，加入抗萊克多巴胺蛋白質(zhì)偶聯(lián)物單克隆抗體或抗沙丁胺醇蛋白質(zhì)偶聯(lián)物單克隆抗體1～10μg/ml膠體金溶液，攪拌2分鐘，加入質(zhì)量濃度為10％的牛血清白蛋白15μl/ml膠體金溶液終止反應(yīng)，離心50分鐘，得沉淀物，取沉淀物用PH為7.4的0.01M?PBS稀釋至步驟2的膠體金溶液體積的30％，制備成抗萊克多巴胺蛋白質(zhì)偶聯(lián)物單克隆抗體或抗沙丁胺醇蛋白質(zhì)偶聯(lián)物單克隆抗體膠體金標(biāo)記物；

(4)固化金標(biāo)物的制備：用載體玻璃纖維吸取抗萊克多巴胺蛋白質(zhì)偶聯(lián)物單克隆抗體或抗沙丁胺醇蛋白質(zhì)偶聯(lián)物單克隆抗體膠體金標(biāo)記物，干燥，制備成抗萊克多巴胺蛋白質(zhì)偶聯(lián)物單克隆抗體或抗沙丁胺醇蛋白質(zhì)偶聯(lián)物單克隆抗體固化金標(biāo)物；

(5)包被膜制備：取兔抗鼠多抗、萊克多巴胺蛋白質(zhì)偶聯(lián)物、沙丁胺醇蛋白質(zhì)偶聯(lián)物，分別包被于硝酸纖維膜上，制備成包被膜，其中：兔抗鼠多抗包被濃度為0.5～5mg/ml，萊克多巴胺蛋白質(zhì)偶聯(lián)物、沙丁胺醇蛋白質(zhì)偶聯(lián)物包被濃度為0.05～2mg/ml；

(6)測(cè)試條裝備：自前而后依次將引水玻璃纖維3，吸附抗萊克多巴胺蛋白質(zhì)偶聯(lián)物單克隆抗體或沙丁胺醇蛋白質(zhì)偶聯(lián)物單克隆抗體膠體金標(biāo)記物的載體玻璃纖維4，包被有兔抗鼠多抗、萊克多巴胺蛋白質(zhì)偶聯(lián)物、沙丁胺醇蛋白質(zhì)偶聯(lián)物的硝酸纖維膜(2)、吸水棉漿板(5)固定粘貼于基材PVC板(1)上，覆蓋上覆膜，切割成長(zhǎng)條即可。