[發明專利]β-興奮劑沙丁胺醇、鹽酸克倫特羅二元檢測測試條及其制備方法

有效

• 申請號: 201010235589.5
• 申請日: 2010-07-26
• 公開（公告）號: CN101936996A
• 公開（公告）日: 2011-01-05
• 發明（設計）人: 王玉金;楊書豪;劉麗
• 申請（專利權）人: 河南省科學院生物研究所有限責任公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/532;G01N33/558
• 代理公司: 鄭州天陽專利事務所(普通合伙) 41113
• 代理人: 聶孟民

1.一種β-興奮劑沙丁胺醇、鹽酸克倫特羅二元檢測測試條，包括基材PVC板和覆膜，其特征在于，基材PVC板(1)上面自前向后依次設置有引水玻璃纖維(3)、載體玻璃纖維(4)、硝酸纖維膜(2)和吸水棉漿板(5)，引水玻璃纖維(3)、載體玻璃纖維(4)和吸水棉漿板(5)上面覆蓋有由前部覆蓋膜(7)和后部覆蓋膜(6)組成的覆膜，測試條前部載體玻璃纖維上吸附有抗沙丁胺醇蛋白質偶聯物、抗鹽酸克倫特羅蛋白質偶聯物單克隆抗體膠體金標記物；中部硝酸纖維膜上自后而前分布有一條包被有兔抗鼠多抗的質控線，二條分別包被有沙丁胺醇蛋白質偶聯物、鹽酸克倫特羅蛋白質偶聯物的檢測線，硝酸纖維膜兩端分別與載體玻璃纖維后端面和吸水棉漿板前端面緊密接觸，載體玻璃纖維前端面和引水玻璃纖維后端面緊密接觸。

2.根據權利要求1所述的β-興奮劑沙丁胺醇、鹽酸克倫特羅二元檢測測試條，其特征在于，所說的覆膜為不干膠膜。

3.權利要求1所述的β-興奮劑沙丁胺醇、鹽酸克倫特羅二元檢測測試條的制備方法，其特征在于，由以下步驟實現：

(1)、膠體金標記單克隆抗體的制備：取1份含有抗沙丁胺醇蛋白質偶聯物或抗鹽酸克倫特羅蛋白質偶聯物單克隆抗體的小鼠腹水與2份60mM醋酸緩沖液混合，18-25℃攪拌下逐滴加入辛酸33μl/ml小鼠腹水，混勻后，18-25℃放置30分鐘，15000轉/分、4℃離心20分鐘，用玻璃棉過濾上清液，棄沉淀物，過濾后的上清液用NaOH調PH值至7.2，再加入硫酸銨，硫酸銨加入量為每1ml?PH值7.2的上清液中加入硫酸銨0.277g，快速使硫酸銨溶解，18-25℃攪拌30分鐘，15000轉/分、4℃離心20分鐘，棄上清液，沉淀物用原小鼠腹水1/2體積的0.01M?PBS?pH?7.2溶液溶解，再放入0.01M?PBS?pH?7.2溶液中浸沒，4℃透析48小時，用紫外分光光度計測定蛋白含量，即制備成膠體金標記用的抗鹽酸克倫特羅蛋白質偶聯物單克隆抗體、抗沙丁胺醇蛋白質偶聯物單克隆抗體；所說的小鼠腹水，其制備方法是，將液體石蠟注射7周齡Balb/c小鼠腹腔內，注射量為500μl/只，10天后，將分泌抗鹽酸克倫特羅蛋白質偶聯物或抗沙丁胺醇蛋白質偶聯物單克隆抗體的雜交瘤細胞注射到小鼠腹腔內，注射雜交瘤細胞的數量為2×10⁶/只鼠，10天后用無菌注射器注射于小鼠腹腔采集腹水，即為抗鹽酸克倫特羅蛋白質偶聯物或抗沙丁胺醇蛋白質偶聯物單克隆抗體的小鼠腹水；

(2)、制備膠體金溶液：在燒杯中加入1000ml蒸餾水，100℃煮沸5分鐘，再加入質量濃度為1％的氯金酸溶液10ml和質量濃度為1％的檸檬酸三鈉溶液15～20ml，攪拌至溶液呈深紅色，冷至18-25℃，用碳酸鉀調PH值至待標記單克隆抗體的等電點或略偏堿，即為待標記的膠體金溶液；

(3)、膠體金標記物的制備：取100ml步驟2中調好PH的膠體金溶液，加入抗鹽酸克倫特羅蛋白質偶聯物單克隆抗體或抗沙丁胺醇蛋白質偶聯物單克隆抗體1～10μg/ml膠體金溶液，攪拌2分鐘，加入質量濃度為10％的牛血清白蛋白15μl/ml膠體金溶液終止反應，離心50分鐘，得沉淀物，沉淀物用PH為7.4的0.01M?PBS稀釋至步驟2的原膠體金溶液體積的30％，制備成抗鹽酸克倫特羅蛋白質偶聯物單克隆抗體或抗沙丁胺醇蛋白質偶聯物單克隆抗體膠體金標記物；

(4)、固化金標物的制備：用載體玻璃纖維吸取抗鹽酸克倫特羅蛋白質偶聯物單克隆抗體或抗沙丁胺醇蛋白質偶聯物單克隆抗體膠體金標記物，干燥，制備成抗鹽酸克倫特羅蛋白質偶聯物單克隆抗體或抗沙丁胺醇蛋白質偶聯物單克隆抗體固化金標物；

(5)、包被膜制備：取兔抗鼠多抗、沙丁胺醇蛋白質偶聯物、鹽酸克倫特羅蛋白質偶聯物，分別包被于硝酸纖維膜上，制備成包被膜；兔抗鼠多抗包被濃度為0.5～5mg/ml，鹽酸克倫特羅蛋白質偶聯物、沙丁胺醇蛋白質偶聯物包被濃度為0.05～2mg/ml；

(6)、測試條裝備：取基材PVC板(1)，將引水玻璃纖維(3)、固化金標物的載體玻璃纖維(4)、構成包被膜的硝酸纖維膜(2)、吸水棉漿板(5)自前向后依次粘貼于基材PVC板(1)上，覆蓋上由前部覆蓋膜(7)和后部覆蓋膜(6)組成的覆膜，切割成長條即可。