[發明專利]一種檢測轉CPTI基因作物的核酸恒溫擴增試劑盒及方法

無效

• 申請號: 201010233347.2
• 申請日: 2010-07-22
• 公開（公告）號: CN101906472A
• 公開（公告）日: 2010-12-08
• 發明（設計）人: 汪琳;賴平安;柏亞鐸;羅英;周琦;蒲靜;張偉;高志強;張向東;齊瑋;凌鳳俊;張瑞宏;李東燕;喬彩霞;吳丹;谷強;張利峰;段向英;劉輝
• 申請（專利權）人: 中華人民共和國北京出入境檢驗檢疫局;物思科技發展(北京)有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一組基于核酸試紙條的檢測轉CPTI基因作物的核苷酸序列，如下：

1)5’-GCTGGTATTTTTCCTTGTAGG-3’(SEQID?NO：1)

2)5’-GACACGAGTTCAACCTGAT-3’(SEQ?ID?NO：2)

3)5’-CGCTTGAGTCTGAATCATGATGATTTTTTACTACTGCAGCAATGGA-3’(SEQ?ID?NO：3)

4)5’-ATGAACCTTCTGAGTCTTCAGAACTTTCTGTATGATGGCATTGAGG-3’(SEQ?ID?NO：4)

5)5’-CCGAGGTGGTTCAAGCAA-3’(SEQ?ID?NO：5)

6)5’-TGCGATTCATGCATCTGCT-3’(SEQ?ID?NO：6)

其中序列1)和2)分別為CPTI檢測的外引物F3和B3，序列3)和4)為CPTI檢測的內引物FIP和BIP，序列5)和6)為CPTI檢測的探針Df和Db，分別標記熒光素和生物素。

2.一種基于核酸試紙條可簡單快速進行結果判定的轉CPTI基因作物檢測試劑盒，48tests/盒，由以下組分組成：

1)LAMP反應液，分別為850μL×1管，含有1×緩沖液、Betaine、MgSO4、dNTP、引物F3和B3、引物FIP和BIP以及探針Db和Df；

2)Bst?DNA聚合酶8U/μL，50μL×1管；

3)滅菌雙蒸水，1mL×2管；

4)陰性對照：1mL×1管，滅菌雙蒸水；

5)陽性對照：1mL×2管，為含有CPTI基因片段的質粒。回收轉CPTI基因作物CPTI基因PCR擴增產物，與PGEM-T?easy載體(購自Promega公司)進行連接，轉化JM109感受態細胞，堿裂解法提取質粒DNA，經PCR和酶切鑒定后獲得陽性重組質粒，命名為PGEM-CPTI。用滅菌雙蒸水將純化質粒進行稀釋，至質?？截悢嫡{整為10⁶拷貝/μl，即為檢測轉CPTI基因作物的陽性對照品。

6)核酸試紙條：48tests。

191bp?CPTI目的片段基因序列如下：

1??gctggtattt?ttccttgtag?gggttactac?tgcagcaatg?gattgcttga?accacctcgg

61?aactaatcat?catgattcag?actcaagcga?tgaaccttct?gagtcttcag?aaccatgctg

121cgattcatgc?atctgctcaa?aatcaatacc?tcctcaatgc?catcatacag?atatcaggtt

181gaactcgtgt?c

3.根據權利要求2所述的轉CPTI基因作物檢測試劑盒，其特征在于：所述檢測CPTI

基因引物序列為：

1)5’-GCTGGTATTTTTCCTTGTAGG-3’(SEQID?NO：1)

2)5’-GACACGAGTTCAACCTGAT-3’(SEQID?NO：2)

3)5’-CGCTTGAGTCTGAATCATGATGATTTTTTACTACTGCAGCAATGGA-3’(SEQ?ID?NO：3)

4)5’-ATGAACCTTCTGAGTCTTCAGAACTTTCTGTATGATGGCATTGAGG-3’(SEQID?NO：4)

5)5’-CCGAGGTGGTTCAAGCAA-3’(SEQ?ID?NO：5)

6)5’-TGCGATTCATGCATCTGCT-3’(SEQID?NO：6)

其中序列1)和2)分別為CPTI檢測的外引物F3和B3，序列3)和4)為CPTI檢測的內引物FIP和BIP，序列5)和6)為CPTI檢測的探針Df和Db，分別標記熒光素和生物素。