[發明專利]一種靶向腫瘤細胞的磷光銥配合物

無效

• 申請號: 201010233221.5
• 申請日: 2010-07-19
• 公開（公告）號: CN101914141A
• 公開（公告）日: 2010-12-15
• 發明（設計）人: 李富友;熊麗琴
• 申請（專利權）人: 復旦大學
• 主分類號: C07K7/64
• 分類號: C07K7/64;C12Q1/02;G01N21/64;G01N15/10
• 代理公司: 上海正旦專利代理有限公司 31200
• 代理人: 張磊

技術領域

本發明屬于腫瘤靶向顯像劑技術領域，具體涉及一種能靶向整合素α_vβ₃表達的腫瘤細胞的磷光銥配合物，該磷光銥配合物作為磷光顯像劑對整合素α_vβ₃表達的腫瘤細胞進行靶向識別和成像。

背景技術

腫瘤顯像技術對于腫瘤的早期診斷與鑒別診斷、臨床分期與治療有著重要的意義。隨著生長抑素受體顯像劑已批準應用于臨床，腫瘤受體顯像正越來越受到重視。整合素α_vβ₃在多種腫瘤細胞表面和新生血管內皮細胞上有高表達，但在成熟血管內皮細胞和絕大多數正常器官系統中α_vβ₃不表達或者很少量的表達，成為腫瘤治療的新靶點。整合素α_vβ₃與RGD肽有特異性作用，使得含RGD肽的靶向顯像研究受到人們的廣泛關注。

RGD肽是一類含有精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(Arg-Gly-Asp)的短肽，廣泛存在于生物體內，其中細胞外基質(ECM)和血液中的粘附蛋白是人體中最常見的含RGD序列的蛋白。其受體整和素家族是由α亞基和β亞基以非共價結合的方式形成的異二聚體，迄今已發現二十余種整和素受體形式，其中，α_vβ₃、α_vβ₅、α_vβ₁與RGD序列的關系最密切。但是RGD三肽序列在體內易被酶解，半衰期短，不便直接應用于臨床，故提高RGD肽與整和素的親和性及其在體內的穩定性和延長其作用時間的研究倍受重視。現已證實，環化肽具有更穩定的結構和更強的親和性。目前文獻報道的環化肽主要有五環肽c(RGDFK)，c(RGDYK)和c(CRGDC)。

熒光成像技術在敏感的腫瘤診斷尤其是在腫瘤的早期診斷階段有著巨大潛力，這是一項靈敏的、非侵入性、非電離性、臨床應用安全、費用相對低廉的技術。為此研究人員不斷致力于新的熒光成像技術和熒光探針的開發和研究。近年來，以磷光重金屬配合物為探針引起了人們的很大興趣，與有機磷光材料相比，磷光重金屬配合物具有較大的Stokes位移和較長的發射壽命，長的發射壽命有利于使用時間分辨技術使磷光信號與背景信號相區分。但到目前為止，只有少數銥配合物被用作細胞染色(Mengxiao?Yu，Fuyou?Li，et?al.，Chem.Commun.2008，2115-2117)，還沒有關于靶向成像腫瘤細胞的銥配合物報道。

發明內容

本發明的目的在于提供一種精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD肽)連接的銥配合物，它具有靶向整合素α_vβ₃表達的腫瘤細胞的能力，可作為腫瘤靶向顯像劑。

本發明提出的靶向成像整合素α_vβ₃表達的腫瘤細胞的磷光顯像劑是指配體含有精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD肽)的銥配合物，具體的結構式為：

銥配合物的制備：銥二氯橋配合物(pq)₂Ir(μ-Cl)₂Ir(pq)₂(pq為2-苯基喹啉)按文獻制備(參見文獻Nonoyama，K.Bull.Chem.Soc.Jpn.1974，47，467-468.)。稱取摩爾比為1∶4的銥二氯橋配合物和RGD肽配體加入到雙頸瓶中，在氮氣或氬氣保護下，用注射器注入2-乙氧基乙醇和水的混合物，二者體積比為1～5，最佳體積比為3∶1，然后將反應混合物加熱至110℃，攪拌反應1～24小時，有沉淀生成。反應停止后將反應混合物降至室溫，將沉淀過濾，收集濾液。濾液使用CombiFlash反相液相色譜(C18，40g)純化，得黃色固體。

該銥配合物的RGD肽配體能與U87MG腫瘤細胞表面過表達的整合素α_vβ₃受體特異性結合，借助這些受體介導的內吞作用，將銥配合物靶向轉運到腫瘤細胞內，觀察到銥配合物的強紅色磷光，而在MCF-7腫瘤細胞中，整合素α_vβ₃受體低表達，只觀察微弱的紅色磷光。

配合物對U87MG細胞和MCF-7細胞的成像實驗：細胞實驗是在DMSO(二甲亞砜)和MEM細胞培養基(改良的Eagle培養基)的緩沖溶液中進行的。配合物溶于DMSO和MEM細胞培養基的緩沖溶液中，分別加入到U87MG細胞和MCF-7細胞中孵育相同時間后，再在共聚焦顯微鏡下觀察。