[發(fā)明專利]一種調(diào)控白念珠菌毒性的因子及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201010233160.2
• 申請(qǐng)日: 2010-07-22
• 公開（公告）號(hào): CN102337218A
• 公開（公告）日: 2012-02-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳江野;劉曉艷;聶鑫怡;丁宇烽
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院
• 主分類號(hào): C12N1/14
• 分類號(hào): C12N1/14;C12Q1/68;C12Q1/02;C07K16/14;G01N33/68;A61K36/064;A61K48/00;A61K39/395;A61P31/10;C12R1/725
• 代理公司: 上海專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 31100
• 代理人: 陳靜

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域；更具體地，本發(fā)明涉及一種調(diào)控白念珠菌毒性的因子及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

白念珠菌(Candida?albicans)是一種臨床上分離到的一種機(jī)會(huì)性人體致病真菌，在免疫下調(diào)的病人中，如器官移植病人、艾滋病毒感染者等，可以引起廣泛的淺部和深部系統(tǒng)感染，感染部位包括口腔、女性陰道等，引起鵝口瘡、陰道炎等疾病，也可以侵入表皮和內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)入血液到達(dá)內(nèi)臟器官，如腎臟、腦部等，導(dǎo)致敗血癥，嚴(yán)重可以導(dǎo)致死亡(Odds，F(xiàn).C.1994.J?Am?Acad?Dermatol.31：S2-S5)。白念珠菌在不同的生長(zhǎng)條件下，呈現(xiàn)不同的生長(zhǎng)形態(tài)，包括菌體(yeast?form)，假菌絲(pseudohyphae)和菌絲(hyphae)。各種形態(tài)之間的相互轉(zhuǎn)化能力直接影響白念珠菌的致病能力(Odds，F(xiàn).C.1985.Grit?Rev?Microbiol.12：45-93；Brown，A.J.P.et?al.1999.Trends?Microbiol.7：334-338)，而形態(tài)轉(zhuǎn)換缺陷的菌株其系統(tǒng)感染能力下降或消失(Lo，H.J.et?al，1997.Cell.90：939-949；Braun，B.R.et?al.2001.EMBO?J.20：4753-61；Hwang，C.S.et?al.2003.Mol?Microbiol.47：1029-43)。

最近有些實(shí)驗(yàn)室利用減毒菌株作為疫苗來免疫小鼠，取得了比較好的效果，并對(duì)其進(jìn)行了深入的生物化學(xué)分析，為疫苗的研制提供了理論基礎(chǔ)(Elena?FA?et?al，Proteomics?2004，4，3007-3020；Elena?FA?et?al，Proteomics2004，4，1204-1215)。許多培養(yǎng)條件可以引起白念珠菌的形態(tài)轉(zhuǎn)換，包括血清、溫度、pH值、氮源利用以及氧壓等等。所有的細(xì)胞都必需具有檢測(cè)細(xì)胞外環(huán)境改變和外界因子刺激的能力，從而對(duì)各種信號(hào)做出正確應(yīng)答的能力。各種外界因子的刺激包括光、激素、神經(jīng)遞質(zhì)、生長(zhǎng)因子及氣味因子等。真核細(xì)胞通過不同的信號(hào)傳導(dǎo)途徑改變蛋白質(zhì)合成從而應(yīng)對(duì)各種外界因子刺激。一般來說，信號(hào)途徑被認(rèn)為是通過調(diào)控轉(zhuǎn)錄從而改變胞內(nèi)蛋白質(zhì)的表達(dá)水平。而最近的研究顯示對(duì)翻譯的調(diào)控也是信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的一個(gè)重要方面。兩條重要的信號(hào)通路Ras和Akt主要介導(dǎo)了特定的mRNA和核糖體的結(jié)合。這種調(diào)控使核糖體對(duì)于正處于翻譯狀態(tài)的mRNAs的識(shí)別發(fā)生了變化，從而導(dǎo)致蛋白合成水平的快速改變。

目前對(duì)于白念珠菌真正的致病因子和致病機(jī)理沒有完全研究清楚，因此本領(lǐng)域還有必要研究白念珠菌的致病因子。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供白念珠菌減毒株(無毒株)。

本發(fā)明的另一目的在于提供一種篩選抑制白念珠菌的毒性的潛在物質(zhì)的方法。

在本發(fā)明的第一方面，提供一種白念珠菌減毒株(無毒株)，所述的減毒株中CaASC1基因基本上不表達(dá)。

在一個(gè)優(yōu)選例中，所述的減毒株(caasc1/caasc1)中CaASC1基因或基因片段缺失。

在另一優(yōu)選例中，所述的減毒株通過同源重組的方法從野生型白念珠菌染色體中敲除CaASC1基因或基因片段獲得。

在另一優(yōu)選例中，所述的CaASC1的基因：

(1)具有SEQ?ID?NO：1或SEQ?ID?NO：2所示的核苷酸序列；或

(2)截短的SEQ?ID?NO：1或SEQ?ID?NO：2所示的核苷酸序列，且該基因不編碼CaAsc1蛋白或編碼降低活性(優(yōu)選活性降低50％，更優(yōu)選降低80％，更優(yōu)選無活性)的CaAsc1蛋白或蛋白片段。

在另一優(yōu)選例中，相對(duì)于野生型白念珠菌，所述的減毒株的菌絲形成能力下降。

在本發(fā)明的另一方面，提供所述的白念珠菌減毒株的用途，用于制備防治(特別是預(yù)防)白念珠菌過度生長(zhǎng)相關(guān)疾病的組合物。

在另一優(yōu)選例中，所述的白念珠菌過度生長(zhǎng)相關(guān)疾病選自(但不限于)：鵝口瘡、陰道炎。

在本發(fā)明的另一方面，提供一種組合物，所述的組合物含有有效量的所述的白念珠菌減毒株和藥學(xué)上可接受的載體。

在另一優(yōu)選例中，所述的組合物是疫苗。

在本發(fā)明的另一方面，提供一種抑制白念珠菌(抑制毒性或菌絲生長(zhǎng))的方法，所述方法包括：抑制白念珠菌中CaAsc1蛋白的表達(dá)或活性。

在本發(fā)明的另一方面，提供一種篩選抑制白念珠菌(抑制毒性或菌絲生長(zhǎng))的潛在物質(zhì)的方法，所述方法包括：