[發(fā)明專(zhuān)利]一種魔芋細(xì)胞液體培養(yǎng)葡甘聚糖的方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201010231540.2
• 申請(qǐng)日: 2010-07-20
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101885784A
• 公開(kāi)（公告）日: 2010-11-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 樂(lè)超銀;王健;郭政宏;梁薇;梁宏偉;王玉兵;陳發(fā)菊
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 三峽大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C08B37/02
• 分類(lèi)號(hào): C08B37/02;A61P1/10;A61P1/16;A61P3/04;A61P3/06;A61P3/10;A61P35/00;A61P37/04
• 代理公司: 宜昌市三峽專(zhuān)利事務(wù)所 42103
• 代理人: 成鋼

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種葡甘聚糖的制備方法，具體涉及一種采用魔芋細(xì)胞液體培養(yǎng)葡甘聚糖的方法。

背景技術(shù)

魔芋學(xué)名為Amorphophallus?konjac，屬單子葉植物綱，天南星科耐蔭性多年生草本植物的塊莖，是我國(guó)的一大特產(chǎn)，廣泛分布于長(zhǎng)江流域。云南、四川產(chǎn)量最大，鄂西、湘西、福建亦有生產(chǎn)。魔芋球莖中含有葡甘聚糖(Konjac?Glucomannan，簡(jiǎn)稱(chēng)KGM)、淀粉、纖維、蛋白質(zhì)和灰分等營(yíng)養(yǎng)成分，其中主要有效成分是葡甘聚糖，是由D-葡萄糖和D-甘露糖通過(guò)β-1，4糖苷鍵合的高分子多糖。它具有多種獨(dú)特理化性質(zhì)，如膨脹性、流變性、增稠性、膠凝性和成膜性等。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外研究證實(shí)，KGM是一種優(yōu)良的低熱量、低脂肪、高纖維素的水溶性膳食纖維，對(duì)營(yíng)養(yǎng)不平衡有重要調(diào)節(jié)作用。諸多學(xué)者研究表明，KGM具有降血糖、血脂及逆轉(zhuǎn)脂肪肝，通便減肥、抗癌、增強(qiáng)免疫功能、抗衰老等奇特的保健作用和醫(yī)療功效，在食品、醫(yī)藥、化工、紡織、石油鉆探等工業(yè)均有很好的應(yīng)用價(jià)值。魔芋由于其來(lái)源受環(huán)境和季節(jié)影響較大，不利于葡甘聚糖的規(guī)模化生產(chǎn)，關(guān)于魔芋細(xì)胞液體培養(yǎng)產(chǎn)葡甘聚糖技術(shù)尚未見(jiàn)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種材料均一、重復(fù)性好的魔芋細(xì)胞液體培養(yǎng)葡甘聚糖的方法。

本發(fā)明的目的是這樣實(shí)現(xiàn)的：一種魔芋細(xì)胞液體培養(yǎng)葡甘聚糖的方法，包括以下步驟：(1)愈傷組織的誘導(dǎo)：用水將花魔芋塊莖表面清洗干凈，經(jīng)過(guò)酒精浸泡、汞浸泡，最后用滅菌水洗滌，削去表皮并切成小塊，將消毒好的魔芋塊莖切塊移入愈傷誘導(dǎo)養(yǎng)基中，控制愈傷誘導(dǎo)養(yǎng)基的pH為6.0，置于暗培養(yǎng)室中培養(yǎng)后將膨大的組織再次切成小塊，移入新配置的愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基進(jìn)一步進(jìn)行培養(yǎng)；(2)細(xì)胞液體培養(yǎng)：將經(jīng)過(guò)愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基培養(yǎng)的生長(zhǎng)旺盛的愈傷組織切碎，接種在盛有液體培養(yǎng)基的容器中培養(yǎng)，得到培養(yǎng)液；(3)葡甘聚糖制取：將培養(yǎng)液離心處理，上清液在攪拌狀態(tài)下加入乙醇，使培養(yǎng)液使含醇量50％，放置24h后，再次離心處理，得到得沉淀物，用50％乙醇處理數(shù)次，沉淀物冷凍干燥得白色物質(zhì)，即葡甘露聚糖。

步驟(1)中的愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基是在1升MS培養(yǎng)液中加入1.0mg?NAA、1.0mg?6-BA和25g乳糖混合而成。

步驟(2)中的液體培養(yǎng)基是在1升MS培養(yǎng)液中加入1.0mg?2，4-D，0.1mgKT和30g乳糖混合而成，控制pH值為6.0。

步驟(1)置于暗培養(yǎng)室中培養(yǎng)是指在26℃的溫度下培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間2個(gè)月。

接種在盛有液體培養(yǎng)基的容器中培養(yǎng)條件是在光照、溫度為25±1℃、110r/min的搖床條件下振蕩培養(yǎng)。

本發(fā)明提供的魔芋細(xì)胞液體培養(yǎng)葡甘聚糖的方法，提出了一種新的以魔芋細(xì)胞液體為主要原料提取葡甘聚糖的方法，解決了魔芋由于其來(lái)源受環(huán)境和季節(jié)影響較大，不利于葡甘聚糖進(jìn)行規(guī)模化生產(chǎn)的問(wèn)題，可實(shí)現(xiàn)從魔芋制取葡甘聚糖的工業(yè)化生產(chǎn)。

附圖說(shuō)明

下面結(jié)合附圖和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明：圖1懸浮液體培養(yǎng)基對(duì)魔芋葡甘露聚糖含量的影響；圖2不同接種量對(duì)魔芋葡甘露聚糖產(chǎn)生的影響；圖3pH對(duì)魔芋葡甘露聚糖含量的影響；圖4不同碳源對(duì)魔芋葡甘露聚糖含量的影響；圖5不同濃度乳糖對(duì)魔芋葡甘露聚糖含量的影響。

具體實(shí)施方式

一、制備實(shí)施例：(1)愈傷組織的誘導(dǎo)：用水將花魔芋塊莖表面清洗干凈，再用75％酒精浸泡1min，0.1％升汞浸泡10min，最后用滅菌水洗滌4次，削去表皮并切成小塊，將消毒好的魔芋塊莖切塊移入愈傷誘導(dǎo)養(yǎng)基中，控制愈傷誘導(dǎo)養(yǎng)基的pH為6.0，置于暗培養(yǎng)室中在26℃的溫度下培養(yǎng)2個(gè)月后將膨大的組織再次切成小塊，移入新配置的愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基進(jìn)一步進(jìn)行培養(yǎng)；上述愈傷誘導(dǎo)養(yǎng)基是在1升MS培養(yǎng)液中加入1.0mg?NAA(萘乙酸)、1.0mg?6-BA(6-芐氨基嘌呤，是一種細(xì)胞分裂素)和30g蔗糖混合而成；(2)細(xì)胞液體培養(yǎng)：將經(jīng)過(guò)愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基培養(yǎng)的生長(zhǎng)旺盛的愈傷組織切碎，接種在盛有液體培養(yǎng)基的容器中，在光照、溫度為25±1℃、110r/min的搖床條件下振蕩培養(yǎng)，得到培養(yǎng)液；液體培養(yǎng)基是在1升MS培養(yǎng)液中加入1.0mg?2，4-D，0.1mgKT(6-糠基腺嘌呤，細(xì)胞分裂素)和30g蔗糖混合而成，控制pH值為6.0。

(3)葡甘聚糖制取：將培養(yǎng)液4000r/min離心5min，上清液在攪拌狀態(tài)下加95％乙醇使含醇量50％，放置24h后，4000r/min離心5min，得沉淀物，反復(fù)用50％乙醇處理數(shù)次，冷凍干燥得白色物質(zhì)，即葡甘露聚糖。