[發明專利]土著益生微生物固體菌劑及其制備方法和應用

無效

• 申請號: 201010231422.1
• 申請日: 2010-07-20
• 公開（公告）號: CN101914445A
• 公開（公告）日: 2010-12-15
• 發明（設計）人: 鐘芳;孫榮高;秦偉志;李春杰;柴青
• 申請（專利權）人: 蘭州市南北兩山環境綠化工程指揮部
• 主分類號: C12N1/00
• 分類號: C12N1/00;C12N1/20;A01N63/02;A01P21/00;A23K1/16;C02F3/34;C05F11/08;C12R1/11;C12R1/07;C12R1/065
• 代理公司: 蘭州振華專利代理有限責任公司 62102
• 代理人: 張真

1.一種土著益生微生物固體菌劑，其特征在于由巨大芽孢桿菌(Bacillus?megaterium)、膠凍樣芽孢桿菌(Bacillus?mucilaginosus)、圓褐固氮菌(Azotobacter?chroococcum)和固體培養基組成，其三種菌株的重量百分比為巨大芽孢桿菌為55～65％、膠凍樣芽孢桿菌為30～35％、圓褐固氮菌5～10％，所述的巨大芽孢桿菌的保藏號為CGMCC?No.3770；所述的膠凍樣芽孢桿菌的保藏號為CGMCC?No.3769；所述的圓褐固氮菌的保藏號為CGMCC?No.3768。

2.如權利要求1所述的土著益生微生物固體菌劑，其特征在于：所述的固體培養基包括有重量百分比為以干料計50-80％的糟渣，15-30％的玉米芯粉，8-12％的麩皮，0.5-0.8％的玉米面，0.1-3％的尿素，0.2-4％的硫酸銨，再加入新鮮豆腐廢水或粉絲廢水或玉米淀粉廢水或洋芋淀粉廢水使其含水重量百分比為45-65％，用1％的石灰水調pH?7.0-7.5。

3.一種土著益生微生物固體菌劑的制備方法，其特征在于包括有如下步驟：

A.土著益生巨大芽孢桿菌、膠凍樣芽孢桿菌瓊脂斜面培養基的制備及菌種的培養：

a.瓊脂斜面培養基的制備：麥芽汁0.5-2％、葡萄糖0.5-2％、蛋白胨0.2-0.6％、瓊脂粉1-3％、無菌水80-120ml，加熱溶解后，用1％的氫氧化鈉調pH值至pH7.0-7.5，經110-114℃，30-35分鐘蒸汽滅菌，然后在無菌條件下分裝于15×1.5cm的干燥滅菌的試管擺成斜面待凝固后備用；

b.菌種的培養：分別取巨大芽孢桿菌、膠凍樣芽孢桿菌的母種瓊脂斜面菌，在無菌條件下，轉種于上述制備的瓊脂斜面培養基上，經28-32℃、24-48小時培養，即得瓊脂斜面菌種，為巨大芽孢桿菌、膠凍樣芽孢桿菌的一級菌種；

B.土著益生圓褐固氮菌瓊脂斜面培養基的制備及菌種的培養：

a.瓊脂斜面培養基的制備：磷酸二氫鉀0.01-0.03％，硫酸鎂0.01-0.03％，氯化納0.01-0.03％，碳酸鈣0.4-0.6％，甘露醇0.8-1.2％，硫酸鈣0.08-0.12％，瓊脂1.8-2.2％，水80-120毫升，加熱溶解，用1％的氫氧化納調pH值6.8-7.0，經110-114℃，30-35分鐘蒸汽滅菌，然后在無菌條件下，分裝于15×1.5cm干燥滅菌的試管擺成斜面待凝固后備用；

b.土著益生圓褐固氮菌菌種的培養：取土著益生圓褐固氮菌的母種瓊脂斜面菌，在無菌條件下轉種于上述制備的瓊脂斜面培養基上，經28-32℃，48-32h，即得土著益生圓褐固氮菌瓊脂斜面菌種，為一級菌種；

C土著益生巨大芽孢桿菌、膠凍樣芽孢桿菌、圓褐固氮菌液體培養基的制備及液體菌種的培養：

a.液體培養基的制備：在1升新鮮豆腐廢水或粉絲廢水或玉米淀粉廢水或洋芋淀粉廢水中加入硫酸銨1-2g，磷酸0.5-1ml，用1％的石灰水調pH?7.0-7.5，分裝于500ml三角燒瓶中，分裝量為瓶子容量的1/4，然后經110-112℃，30-35分鐘高壓滅菌，冷卻后備用；

b.分別取巨大芽孢桿菌、膠凍樣芽孢桿菌和圓褐固氮菌的一級菌種，在無菌條件下，接種于液體培養液中，經28-32℃、24-48小時培養，其培養液為二級菌種；

c.分別取巨大芽孢桿菌、膠凍樣芽孢桿菌和圓褐固氮菌的二級菌種再擴大培養，上搖床振蕩培養，經振幅100～120r/min、溫度28～32℃、18～24小時培養，其菌液為三級菌種；

d.分別將重量百分比為巨大芽孢桿菌為55～65％、膠凍樣芽孢桿菌為30～35％、圓褐固氮菌5～10％三級菌種再擴大培養，三種菌在同一個發酵罐，經28-32℃、18-24小時的通氣攪拌發酵培養，其菌液為巨大芽孢桿菌、膠凍樣芽孢桿菌和圓褐固氮菌混合菌劑，或為四級菌種繼續逐級擴大培養，用此菌劑作為制備固體菌劑的菌種；

D.固體菌劑的培養：

將含水比為60-80％新鮮的豆腐渣或粉絲渣或玉米淀粉渣或洋芋淀粉，加入經0.5-1.2％H₂SO₄處理的玉米芯粉和麩皮、玉米面，其中玉米芯粉、麩皮、玉米面的重量比為2～4∶1～3∶0.5～1，并加入相對于干料的0.2-4％的硫酸銨，相對于干料的0.1-3％的尿素，均勻攪拌，使其含水量達到45-65％，用1％的石灰水調pH7.0-7.5，然后加入相對于干料總量為8-12％巨大芽孢桿菌、膠凍樣芽孢桿菌和圓褐固氮菌混合菌液，充分攪拌混合均勻后，在發酵和干燥兩用發酵池中經溫度28～32℃通風攪拌發酵18～24小時后，再經40～60℃通熱風干燥，制成巨大芽孢桿菌、膠凍樣芽孢桿菌和圓褐固氮菌固體菌劑。

4.如權利要求1所述的土著益生微生物固體菌劑的應用，其特征在于：所述的微生物固體菌劑應用于農作物和植物生長劑或畜禽飼料添加劑。