[發明專利]特定功能微生物制品的制備方法

有效

• 申請號: 201010231320.X
• 申請日: 2010-07-20
• 公開（公告）號: CN102334684A
• 公開（公告）日: 2012-02-01
• 發明（設計）人: 陳麗秋;王淼;曾廣維
• 申請（專利權）人: 哈爾濱龍豬科技開發有限公司
• 主分類號: A23L1/30
• 分類號: A23L1/30;C12N1/20;C12R1/225;C12R1/245;C12R1/24
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1.一種特定功能微生物制品的制備方法，其特征是：1)(1)從極端化環境下分離乳酸乳桿菌對所獲得得菌株采取極端環境條件的塞選試驗：(1)經過50攝氏度耐高溫試驗；(2)PH3的耐酸試驗：PH3的意思是調節培養基的PH值為3的試驗；(3)耐高鹽試驗；(4)對沙門氏桿菌、痢疾桿菌、傷寒桿菌、副傷寒桿菌、彎曲桿菌、葡萄球的拮抗實驗拮抗能力的驗證試驗；從中選育出的德氏乳桿菌菌株(delbrueckii?subsp.Lactis)、干酪乳桿菌菌株(paracasei)短乳桿菌(Lactobacillus?brevis)作為工程菌株，挑取工程菌株分別接種到mrs斜面培養基上備用，mrs培養基的組織成分：

組成成分?重量(g)

牛肉蛋白粉?10

魚肉汁?10

酵母浸出汁粉?5

葡萄糖?20

醋酸鈉?5

檸檬酸二銨?2

吐溫80?0.1

硫酸鎂?0.58

硫酸錳?0.28

蒸溜水?1000ml

固體：瓊脂15g

備注：用高壓鍋在121℃滅菌15min，調節pH6.2～6.4；

2)制備一次活化培養培養基，其培養基的配方如下：大豆蛋白胨50g，牛肉粉30g，酵母粉30g，葡萄糖200g，乳糖20g，番茄汁50ml，去離子水1000ml，將以上組份溶解于去離子水中，將其裝入2l的三角瓶中，在121℃的條件下高壓蒸汽滅菌20min后，放入-4℃的冰箱中待用；

3)一次活化培養：將一次活化培養的培養基20ml，分裝到100ml培養瓶中，用5ml生理鹽水沖洗德氏乳桿菌(delbrueckii?subsp.Lactis)、干酪乳桿菌(paracasei)短乳桿菌(Lactobacillus?brevis)菌種斜面，將沖洗下來的菌液轉種到一次活化培養的培養基中，在溫度為36±1℃條件下，厭氧靜止培養16~18h，待測定ph值在3.8-4.5范圍時，表明一次活化培養狀態達到要求；

4)配制二次擴大培養：大豆蛋白胨200g，棉籽糖20g，番茄汁100ml，氯化鈉10克，去離子水2000ml，將以上各組分溶解在去離子水中，加入到容量為4l的小型發酵罐中，在121℃條件下高壓蒸汽滅菌20min待用；

5)二次擴大培養將各個菌株的一次活化培養的發酵液同時接種到二次擴大培養培養的培養液中，將溫度調到40℃恒溫厭養靜止培養12-14h，待發酵液的ph達到3.8-4.5時，表明二次擴大培養狀態達到要求；

6)配制凍干保護劑：脫脂乳720g，甘油30ml，乳糖200g，葡萄糖200g，去離子水6000ml，將以上組份溶解到去離子水中，攪拌均勻后裝到10l的三角瓶中，在118℃條件下高壓蒸汽滅菌15min后放入-4℃的冰箱中待用；

7)收集發酵菌泥：將二次擴大培養得到的發酵液在無菌條件下裝入離心機的離心管中，在10000rpm/min條件下，離心5min后，在無菌的超凈工作臺內，倒掉上清液，所得到的干物質為菌泥，收集菌泥后立即加入到裝有凍干保護劑的10l的三角瓶中待用；

8)將收集的菌泥與凍干保護劑混勻，其中發酵后菌泥與凍干保護劑的比例為1∶3；

9)凍干：將混合均勻的菌泥和凍干保護劑裝入凍干瓶中，凍干瓶轉入-40℃的冰箱中預凍4h，然后將凍干瓶轉入真空冷凍干燥機，凍干24h，即可以得到活菌數達到10¹¹/克的乳酸菌添加劑。