[發明專利]一種結核分枝桿菌38Kd-11Kd-CFP10重組融合蛋白及其應用

無效

• 申請號: 201010230981.0
• 申請日: 2010-07-20
• 公開（公告）號: CN101914562A
• 公開（公告）日: 2010-12-15
• 發明（設計）人: 張娟;蔣俊;董亞俊;吳雪瓊
• 申請（專利權）人: 沈陽市胸科醫院
• 主分類號: C12N15/62
• 分類號: C12N15/62;C12N15/63;C12N1/21;C07K19/00;C07K16/12;G01N33/543;G01N33/569;C12R1/19
• 代理公司: 沈陽杰克知識產權代理有限公司 21207
• 代理人: 金春華

1.一種編碼結核分枝桿菌38Kd-11Kd-CFP10重組融合蛋白的融合基因，其特征在于：其核苷酸序列如SEQ?ID?NO：1所示。

2.一種結核分枝桿菌38Kd-11Kd-CFP10重組融合蛋白，其特征在于：它由權利要求1所述的融合基因編碼，其氨基酸序列如SEQ?ID?NO：2所示。

3.一種結核分枝桿菌38Kd-11Kd-CFP10重組融合蛋白的表達載體，其特征在于：它是將權利要求1所述的融合基因按照如圖1所示的構建方式插入到質粒pET-28b上得到的重組質粒pET-28b-38Kd-11Kd-CFP10。

4.一種表達結核分枝桿菌38Kd-11Kd-CFP10重組融合蛋白的工程菌株，其特征在于：它含有權利要求3所述的表達載體pET-28b-38Kd-11Kd-CFP10，其宿主菌為大腸桿菌(Escherichia?coli)。

5.一種結核分枝桿菌抗體IgG酶聯免疫檢測試劑盒，其特征在于：它包括權利要求2所述的38Kd-11Kd-CFP10重組融合蛋白和酶標二抗，所述38Kd-11Kd-CFP10重組融合蛋白的包被量為0.5-4.0μg/孔，酶標二抗工作濃度為2.0-16.0mg/mL。

6.根據權利要求5所述的檢測試劑盒，其特征在于：38Kd-11Kd-CFP10重組融合蛋白的包被量為2.0μg/孔，酶標二抗工作濃度為2.0mg/mL。

7.一種結核分枝桿菌抗體IgG診斷試劑盒，它包括TB抗原、膠體金標記TB抗原和質控線包被兔抗TB抗體，其特征在于：所述TB抗原和膠體金標記TB抗原均是由根據權利要求2所述的38Kd-11Kd-CFP10重組融合蛋白制得。

8.根據權利要求7所述的試劑盒，其特征在于：TB抗原噴點濃度為0.25-2.0mg/mL，膠體金標記TB抗原染色液的工作濃度為OD值50.0-100.0，TB抗原噴點量為0.5-1.75μL/cm，膠體金標記TB抗原噴點量為0.5-1.75μL/cm，質控線包被兔抗TB抗體包被濃度為0.5-2.0mg/mL，反應膜封閉時間為45-75分鐘，反應膜干燥條件為相對濕度25％-30％下干燥30-75分鐘，膠體金標記TB抗原墊干燥條件為相對濕度25％-30％下干燥3-5小時，標本檢測反應時間為15℃～30℃下反應10-30分鐘，溫度低于15℃時標本檢測反應時間40-50分鐘。

9.根據權利要求8所述的試劑盒，其特征在于：TB抗原噴點濃度為1.0mg/mL，膠體金標記TB抗原染色液的工作濃度為OD值80.0，TB抗原噴點量為1.0μL/cm，膠體金標記TB抗原噴點量為1.0μL/cm，質控線包被兔抗TB抗體包被濃度為1.0mg/mL，反應膜封閉時間為60分鐘，反應膜干燥條件為相對濕度25％-30％下干燥60分鐘，膠體金標記TB抗原墊干燥條件為相對濕度25％-30％下干燥4小時，標本檢測反應時間為15℃～30℃下反應25-30分鐘。

10.根據權利要求2所述的結核分枝桿菌38Kd-11Kd-CFP10重組融合蛋白在制備單抗、多抗、檢測試劑盒及蛋白芯片中的應用。