[發明專利]一種檢測恩諾沙星的光激化學發光免疫分析法及其試劑盒

無效

• 申請號: 201010230789.1
• 申請日: 2010-07-14
• 公開（公告）號: CN101893621A
• 公開（公告）日: 2010-11-24
• 發明（設計）人: 黃飚;趙莉莉;張玨;張藝;周彬;陳蘊;金堅
• 申請（專利權）人: 江蘇省原子醫學研究所
• 主分類號: G01N33/531
• 分類號: G01N33/531;G01N33/53
• 代理公司: 無錫市大為專利商標事務所 32104
• 代理人: 時旭丹;劉品超

1.一種檢測恩諾沙星ENR的光激化學發光免疫分析試劑盒，其特征在于由白色不透明微孔板(1)，恩諾沙星標準品(2)，包被有ENR-OVA的發光微粒(3)，兔抗ENR抗體凍干品(4)，生物素化羊抗兔抗體凍干品(5)，和包被有鏈霉親和素的感光微粒(6)組成。

2.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于包被有ENR-OVA的發光微粒(3)的制備：在離心管中加入1mg發光微粒，加入12.5μL?1％Tween-20，0.05mgENR-OVA人工抗原，10μL的25mg/mL硼氫化氰鈉溶液，用0.1M、pH6.0的2-(N-嗎啉)乙磺酸緩沖液將體積補充到200μL，37℃避光振蕩反應48小時，加入10μL?0.3M、pH?5.0的羧甲氧基胺半鹽酸鹽溶液封閉未結合位點，37℃避光孵育1小時，離心純化，洗去未反應的試劑后，分離得到包被有ENR-OVA的發光微粒，稀釋后備用。

3.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于ENR標準品(2)的配制：ENR標準品濃度分別為：0ng/mL，0.1ng/mL，1ng/mL，10ng/mL，50ng/mL，100ng/mL，從ENR純品中稀釋得到，稀釋液為蒸餾水。

4.一種用權利要求1所述的試劑盒檢測ENR的方法，其特征在于取包被有ENR-OVA的發光微粒加入到白色不透明微孔板；加入ENR標準或處理好的樣品到各自的微孔中，然后各孔順序加入兔抗ENR抗體、生物素化羊抗兔抗體進行標記免疫反應；接著暗處加入包被有鏈霉親和素的感光微粒進行反應，反應后檢測光信號，對照標準曲線計算被測樣品中的ENR含量。

5.根據權利要求4所述的檢測ENR的方法，其特征在于操作為：

取20μL包被有ENR-OVA的發光微粒加入到白色不透明微孔板；加入20μL的ENR標準或處理好的樣品到各自的微孔中；加20μL兔抗ENR抗體；繼續加入20μL生物素化羊抗兔抗體，37℃孵育15分鐘；暗處加175μL包被有鏈霉親和素的感光微粒，37℃暗處孵育15分鐘，反應后在光激化學發光檢測儀上檢測光信號，從標準曲線計算被測樣品中的ENR含量。