[發明專利]一種從豬血中提取超氧化物歧化酶SOD的方法

無效

• 申請號: 201010230060.4
• 申請日: 2010-07-19
• 公開（公告）號: CN102337252A
• 公開（公告）日: 2012-02-01
• 發明（設計）人: 宋古全;盧進峰;吳明文;王雅靜
• 申請（專利權）人: 天津寶迪農業科技股份有限公司
• 主分類號: C12N9/08
• 分類號: C12N9/08
• 代理公司: 天津盛理知識產權代理有限公司 12209
• 代理人: 董一寧

1.一種從豬血中提取超氧化物歧化酶SOD的方法，其特征在于：依照如下步驟進行：

(1)向豬血中加入抗凝劑，離心3000rpm離心10～30min去血漿，收集紅細胞；然后加入紅細胞體積3～5倍的0.9％NaCl溶液進行清洗，離心4000rpm離心10～30min，棄去上清液后，收集紅細胞并加入紅細胞體積1～3倍體積的去離子水，0～4℃水浴下靜置10-15h后得到溶血液；

(2)向溶血液中緩慢加入4℃以下冷預過的95％乙醇后，再緩慢加入預冷過的的氯仿，然后攪拌、靜置、離心后收集上清液獲得粗酶液；

(3)向粗酶液中加入丙酮，然后攪拌、離心，取沉淀物；

(4)將沉淀物用加入1-3倍體積的去離子水進行溶解，并進行熱處理后，迅速冰浴至4℃以下，然后，加入K₂HPO₄緩沖液，攪拌、離心后獲得上清液；

(5)采用螺旋梯度洗脫技術對上清液進行純化處理，獲得純化酶液；

(6)將純化酶液通過透析工藝除去鹽離子，并最終將精致酶液進行冷凍干燥，可以獲得最終的豬血SOD成品。

2.根據權利要求1所述的一種從豬血中提取超氧化物歧化酶SOD的方法，其特征在于：上述抗凝劑采用草酸鉀溶液，其濃度為2～5％，其體積是豬血體積的10％。

3.根據權利要求1所述的一種從豬血中提取超氧化物歧化酶SOD的方法，其特征在于：上述去離子水的pH＝9。

4.根據權利要求1所述的一種從豬血中提取超氧化物歧化酶SOD的方法，其特征在于：上述步驟(2)中95％乙醇的加入量是溶血液體積的0.2～0.5倍，氯仿的加入量是溶血液體積的0.1～0.5倍，溶血液加入95％乙醇和氯仿后攪拌10-20min、靜置0.5-1h、4000rmp離心10～30min，收集上清液獲得粗酶液。

5.根據權利要求1所述的一種從豬血中提取超氧化物歧化酶SOD的方法，其特征在于：上述步驟(3)中丙酮的加入量是粗酶液體積的1～3倍，粗酶液加入丙酮后攪拌10-15min，4000rmp離心10～30min，取沉淀物。

6.根據權利要求1所述的一種從豬血中提取超氧化物歧化酶SOD的方法，其特征在于：上述步驟(4)中熱處理的條件為溫度40～70℃、時間10～30min；K₂HPO₄緩沖液的加入量是沉淀物體積的20～30倍，沉淀物加入K₂HPO₄緩沖液后攪拌5-8min，然后4000rmp離心10～30min，獲得上清液。

7.根據權利要求1所述的一種從豬血中提取超氧化物歧化酶SOD的方法，其特征在于：上述步驟(5)中螺旋梯度洗脫技術采用濃度為2～50mmol/L、pH值為7.2～9.0的K₂HPO₄緩沖液通過梯度鹽析原理使雜質逐級沉淀的方法來實現SOD酶的純化。