[發明專利]一種利用豬血制備凝血酶的方法

無效

• 申請號: 201010230028.6
• 申請日: 2010-07-19
• 公開（公告）號: CN102337255A
• 公開（公告）日: 2012-02-01
• 發明（設計）人: 宋古全;張立娟;朱稀檁;王雅靜
• 申請（專利權）人: 天津寶迪農業科技股份有限公司
• 主分類號: C12N9/74
• 分類號: C12N9/74
• 代理公司: 天津盛理知識產權代理有限公司 12209
• 代理人: 董一寧

1.一種利用豬血制備凝血酶的方法，其特征在于：依照下列步驟進行：

(1)向豬血中加入抗凝劑，離心分離，取上層的抗凝血漿；

(2)向抗凝血漿中加入BaCl₂溶液后依次進行攪拌、靜置、離心，然后棄上清；

(3)將步驟(2)中的沉淀依次通過洗滌、離心后，棄上清，重復洗1-2次或多次；

(4)將步驟(3)中的沉淀用pH為5.3的EDTA溶解，調pH至5.3，然后靜置、離心、棄上清；

(5)將步驟(4)中的沉淀用生理鹽水溶解，得凝血酶原溶液，凝血酶原溶液用2％Na₂CO₃溶液調pH至7.1，加入凝血酶原的活化劑，使Ca²⁺終濃度為0.02-0.04mol/L，再用2％Na₂CO₃溶液將凝血酶原溶液的pH調至7.1，室溫靜置2-3h，過濾即得凝血酶溶液；

(6)將凝血酶溶液凍干，即得凝血酶產品。

2.根據權利要求1所述的一種利用豬血制備凝血酶的方法，其特征在于：上述抗凝劑采用檸檬酸鈉，其添加量為3.8‰-4.5‰。

3.根據權利要求1所述的一種利用豬血制備凝血酶的方法，其特征在于：上述BaCl₂溶液與抗凝血漿的體積比為1∶10，兩者混合后4℃攪拌30min，靜置30min后，3000r/min離心30min，棄上清。

4.根據權利要求1所述的一種利用豬血制備凝血酶的方法，其特征在于：上述步驟(2)中的沉淀通過0.02mol/L?Tris、0.15mol/L?BaCl₂和0.10mol/L?NaCl混合后形成的pH為7.4的溶液洗滌，3000r/min離心15min，棄上清。

5.根據權利要求1所述的一種利用豬血制備凝血酶的方法，其特征在于：上述步驟(4)中的沉淀通過0.2mol/L?EDTA溶解后4℃放置6-8h，3000r/min離心15min，棄上清。

6.根據權利要求1所述的一種利用豬血制備凝血酶的方法，其特征在于：上述凝血酶原的活化劑采用0.25mol/L?CaCl₂溶液。