[發明專利]含有2-酮戊二酸脫羧酶基因kgd的工程菌及其用途

有效

• 申請號: 201010228730.9
• 申請日: 2010-07-16
• 公開（公告）號: CN101906394A
• 公開（公告）日: 2010-12-08
• 發明（設計）人: 陳國強;呂渭川;周子振
• 申請（專利權）人: 天津國韻生物材料有限公司
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N15/70;C12N15/74;C12P7/62;C12R1/01;C12R1/19
• 代理公司: 北京天昊聯合知識產權代理有限公司 11112
• 代理人: 丁業平;金小芳

1.一種利用糖類碳源生產3-羥基丁酸和4-羥基丁酸共聚酯的工程菌，其特征在于含有2-酮戊二酸脫羧酶基因kgd。

2.權利要求1所述的工程菌，其中糖類碳源可以為葡萄糖、葡萄糖酸鈉、果糖、甘露醇之一或其組合或者經過水解后含有葡萄糖、葡萄糖酸鈉、果糖、甘露醇之一的多糖。

3.權利要求1所述的工程菌為R.eutropha?H16(pMCS4HBRE)或E.coli?JM109SG(pBHR68orfZ+pMCS4HB)之一；其中R.eutropha?H16(pMCS4HBRE)所含的表達載體的物理圖譜如圖1所示，E.coli?JM109SG(pBHR68orfZ+pMCS4HB)所含的表達載體的物理圖譜如圖2所示。

4.權利要求1～3任一所述的工程菌，為將3-羥基丁酸和4-羥基丁酸共聚酯生物合成所需基因的重組表達載體轉入到宿主菌后得到重組菌。

5.權利要求4所述的工程菌，其中所述3-羥基丁酸和4-羥基丁酸共聚酯生物合成所需基因包括來源于羅氏真養桿菌Ralstonia?eutropha的聚-3-羥基丁酸酯合成基因phaCAB，來源于克氏梭菌Clostridium?kluyveri的4-羥基丁酰輔酶A：輔酶A轉移酶基因orfZ，來源于克氏梭菌Clostridium?kluyveri的4-羥基丁酸脫氫酶基因4hbD和來源于結核分枝桿菌Mycobacteriumtuberculosis的2-酮戊二酸脫羧酶基因kgd。

6.權利要求4所述的工程菌，其中宿主菌可為大腸桿菌或羅氏真養桿菌的野生型，也可為大腸桿菌或羅氏真養桿菌的琥珀酸半縮醛脫氫酶基因突變株。

7.權利要求6所述的工程菌為大腸桿菌或羅氏真養桿菌的琥珀酸半縮醛脫氫酶基因突變株。

8.權利要求6所述的工程菌在大腸桿菌中重組表達的載體的出發載體為pBluescript?II?SK(-)和pBBR1MCS-2(NCBI?GenBank號為U23751)；在羅氏真養桿菌中重組表達的載體的出發載體為pBBR1MCS-2。

9.一種生產3-羥基丁酸和4-羥基丁酸共聚酯的方法：將權利要求1～8任一所述的工程菌，在添加糖類碳源的情況下，經過發酵培養得到3-羥基丁酸和4-羥基丁酸共聚酯。

10.權利要求9所述的生產3-羥基丁酸和4-羥基丁酸共聚酯的方法，其中大腸桿菌工程菌的發酵溫度為28-38℃；所述羅氏真養桿菌工程菌的發酵溫度為30-33℃。