[發(fā)明專利]靜態(tài)恒磁場在延長原代細(xì)胞維持時間中的應(yīng)用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010226998.9
• 申請日: 2010-07-15
• 公開（公告）號: CN101892219A
• 公開（公告）日: 2010-11-24
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 孟紅;張子毅
• 申請（專利權(quán)）人: 孟紅;張子毅
• 主分類號: C12N13/00
• 分類號: C12N13/00;C12N5/071;C12N5/073
• 代理公司: 濟(jì)南圣達(dá)專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 37221
• 代理人: 楊琪

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及靜態(tài)恒磁場在延長原代細(xì)胞維持時間中的應(yīng)用，屬于細(xì)胞培養(yǎng)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

細(xì)胞體外培養(yǎng)是生物、醫(yī)學(xué)等多領(lǐng)域常用的研究工具，其中二倍體細(xì)胞、尤其原代細(xì)胞的培養(yǎng)在相關(guān)領(lǐng)域中占有重要位置。目前，多數(shù)原代細(xì)胞傳代培養(yǎng)困難，甚至不能傳代(人胚肺體外可傳代50～60代)，一般體外培養(yǎng)的原代細(xì)胞維持時間為10～20d，再久則細(xì)胞衰老，失去應(yīng)用價值。因此，人們急需一種能夠延長細(xì)胞維持時間的方法。

現(xiàn)有技術(shù)中，為了延長原代細(xì)胞存活時間，相關(guān)技術(shù)人員多采取降低培養(yǎng)溫度、降低培養(yǎng)液中的營養(yǎng)成分(降低營養(yǎng)成分的培養(yǎng)液稱為維持液，比如含2％新生牛血清的MEM培養(yǎng)基)等方法，未見有用靜態(tài)恒磁場延長原代細(xì)胞維持時間的報道。

發(fā)明內(nèi)容

針對上述現(xiàn)有技術(shù)，為解決體外培養(yǎng)的原代細(xì)胞維持時間短的缺陷，本發(fā)明提供了一種解決方案，即：利用磁場來延長原代細(xì)胞的維持時間，本發(fā)明的方法可使細(xì)胞維持時間超過30d，且細(xì)胞長勢旺盛，甚至沿立壁體生長。

應(yīng)用的方式為：將細(xì)胞置于磁場中培養(yǎng)，磁場設(shè)置于貼近細(xì)胞的外壁上。

具體為：對于采用細(xì)胞培養(yǎng)板培養(yǎng)的細(xì)胞，則將磁場設(shè)置于細(xì)胞培養(yǎng)板的底部；對于采用細(xì)胞培養(yǎng)瓶的細(xì)胞，則將磁場設(shè)置于細(xì)胞培養(yǎng)瓶的底部；對于采用轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)的細(xì)胞，則將磁場設(shè)置于轉(zhuǎn)瓶外壁上(不妨礙轉(zhuǎn)動)。

所述磁場為靜態(tài)恒磁場，磁力范圍為500～3000高斯。

所述原代細(xì)胞為來源于包括人類的所有動物的組織細(xì)胞，比如肝細(xì)胞、腎細(xì)胞、晶體細(xì)胞、睪丸細(xì)胞等。

注意：本發(fā)明的方法不適用于腫瘤細(xì)胞，因為腫瘤細(xì)胞往往表現(xiàn)為生長方式的改變。

本發(fā)明采用在細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境中添加磁場的方式延長體外原代細(xì)胞的維持時間，可使細(xì)胞維持時間超過30d，且細(xì)胞長勢旺盛，效果非常好。

附圖說明

圖1為人胚肺細(xì)胞的培養(yǎng)圖(200×)。

具體實施方式

下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步的說明。

實施例1?人胚肺細(xì)胞的培養(yǎng)：

1：原代人胚肺細(xì)胞的制備：無菌條件下取胚胎肺組織，超凈臺中(局部百級)用剪刀剪碎，加胰酶在37℃條件下消化20min，棄胰酶，加細(xì)胞培養(yǎng)液懸浮吹打，然后將懸浮液過100目紗網(wǎng)去掉組織塊，將濾液調(diào)整細(xì)胞濃度為10⁵/ml，接種于細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，置37℃、5％二氧化碳、95％空氣環(huán)境中靜止培養(yǎng)，3日后長成單層，為原代人胚肺細(xì)胞。

2：人胚肺細(xì)胞的傳代

將已經(jīng)長成單層的人胚肺細(xì)胞用平衡鹽水洗3次，去掉未貼壁細(xì)胞和組織塊，加0.125％胰酶在室溫條件下消化3min，棄胰酶，加細(xì)胞培養(yǎng)液吹打懸浮，然后以1∶2比例分瓶傳代，置37℃、5％二氧化碳、95％空氣環(huán)境中靜止培養(yǎng)，3日后長成單層，為次代人胚肺細(xì)胞。

3：人胚肺細(xì)胞的維持

將已經(jīng)長成單層的次代人胚肺細(xì)胞(4瓶)棄培養(yǎng)液，加含2％新生牛血清的MEM加以維持，2瓶置入37℃、5％二氧化碳、95％空氣的靜態(tài)磁場(800高斯)的環(huán)境中靜止培養(yǎng)，同時2瓶置無磁環(huán)境作為對照組(余條件相同)，20d時觀察細(xì)胞狀況(中間未更換或添加新的培養(yǎng)液)，發(fā)現(xiàn)所有細(xì)胞培養(yǎng)液已變?yōu)闄幟庶S色，表明細(xì)胞處于酸性環(huán)境，對照組2瓶細(xì)胞變得稀疏、脹大，出現(xiàn)遮光性顆粒，而磁場中2瓶細(xì)胞形態(tài)良好，繼續(xù)維持培養(yǎng)至35d時終止試驗，觀察培養(yǎng)液呈黃色(pH呈酸性)，顯微鏡下觀察細(xì)胞呈纖維狀，平鋪排列呈致密單層，未見明顯遮光性顆粒，無脫落，見圖1。表明靜態(tài)磁場環(huán)境延長了細(xì)胞存活時間。