[發明專利]蟬花蟲草與紅曲霉固體共發酵高產功效成分的方法

無效

• 申請號: 201010226738.1
• 申請日: 2010-07-15
• 公開（公告）號: CN102329848A
• 公開（公告）日: 2012-01-25
• 發明（設計）人: 虞泓;葛峰;陳自宏;曾文波
• 申請（專利權）人: 云南云百草生物技術有限公司
• 主分類號: C12P39/00
• 分類號: C12P39/00;C12P19/04;C12P17/06;C12R1/645
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技術領域

本發明屬微生物發酵技術領域，涉及一種采用蟬花蟲草與紅曲霉固體共發酵高產功效成分的方法。

背景技術

蟬花Cordyceps?cicadae?X.Q.Shing的藥用已有1000多年的歷史。在南北朝劉宋時代的《雷公炮炙論》中就記載了蟬花的加工；宋朝唐慎微所著《經史證類備急本草》中言“蟬花味甘寒，無毒，主小兒天吊，夜啼，心悸”。遲秋陽等(1996)將蟬花蟲草菌株進行人工發酵產生蟬花蟲草菌絲，從中提取蟬花蟲草多糖，對小鼠進行淋巴轉化試驗、Ea及E玫瑰花試驗、特異性免疫玫瑰花試驗(IR-FC)、巨噬細胞吞噬試驗、抗綿羊紅細胞(SRBC)抗體效價試驗。結果表明蟬花蟲草多糖具有明顯的提高免疫功能作用(P＜0.011～P＜0.05)。

紅曲霉Monasus?rubber?Van?Tieghem是制造紅曲米的主要微生物，其色素、抑菌和遏制膽固醇合成、降血脂的生理活性成分在醫藥和營養保健食品方面有廣泛的應用前景。紅曲米自古入藥，《飲膳正要》有紅曲“昧甘、平、無毒”，“健脾、益氣、溫中”；《本草綱目》有“甘、溫、無毒，治女人血痛及產后惡血不凈，擂酒飲之良”；《本草衍義補遺》有“活血、消食、健脾暖胃，治赤白痢、下水谷”；《本草備要》有“人營而破血、燥胃消食、活血和血、治赤白下痢，跌打損傷”等記載。經國內外現代科學技術深入研究認為，紅曲中的洛伐他汀為主要功效成分，在治療由高血脂誘發的心腦血管疾病的降血脂和降膽固醇藥物中，洛伐他汀是公認的最安全、可靠、有效的首選藥物。

關于蟬花蟲草和紅曲霉單獨培養，國內有很多報道。陳祝安等報道了蟬花的人工培養，分析了液體、固體培養蟬花的培養特性，指出蟬花對碳源的高敏感性，培養基中含碳量高(20％左右)，產孢梗束多而不易老化，分生孢子有推遲產生的現象(陳祝安等，真菌學報，1993，12(2)：138-144)。劉愛英等報道了提高紅曲霉發酵產品Monacolin?K含量的研究，在紅曲培養過程中添加真菌激發子，能明顯提高固態發酵產品Monacolin?K含量達到34.99mg/g(劉愛英等，貴州農業科學，2007，35(6)：5-7)。周禮紅等報道了紅曲霉與蛹蟲草固體共發酵的方法，蟲草素含量提高了2.5倍(周禮紅等，食用菌，2008，3：40-42)。本發明充分利用蟬花蟲草菌CCIC-3-1和紅曲霉菌種MRUB-5固體共發酵高效轉化培養基中碳源和氮源的優勢，相互促進生長，使固體發酵產物的功效成分的生物合成能力顯著增強。

發明內容

本發明提供了一種采用蟬花蟲草與紅曲霉固體共發酵高產功效成分的方法。

該方法的操作步驟如下：

(1)生產菌株為蟬花Cordyceps?cicadae?X.Q.Shing菌株CCIC-3-1；以及紅曲霉Monasus?rubber?Van?Tieghem菌株MRUB-5；

(2)菌種制備：將步驟(1)所述菌株CCIC-3-1和MRUB-5分別接種到PDA斜面培養基，于28℃恒溫培養10d，用無菌水洗下孢子，稀釋調整使孢子終濃度達到5×10⁷個/毫升；

(3)固體共發酵培養基的制備：固體培養基的配方為：大米、玉米粉、薏仁米中的一種，含量60％，麩皮含量30％，谷糠含量5％，大豆粉含量5％。按10％-40％的培養基體積裝入1000ml三角瓶中，121℃高壓滅菌60min；

(4)固體共發酵培養：將步驟(2)中制備好的菌種懸液按1ml/100g固體培養基的量分別接入步驟(3)中各種固體培養基中，于24-28℃，靜置培養15天，直到菌絲長滿培養基即成固體發酵物；

(5)固體發酵物后處理：將步驟(4)中培養好的固體發酵物取出，50℃恒溫干燥至恒重，然后粉碎至80目粉末，采用HPLC法測定多糖和洛伐他汀的含量。

本發明的關鍵點在于：蟬花蟲草與紅曲霉固體共發酵培養基中選擇適宜的碳源，固體培養基的培養基體積和培養溫度的控制，以上關鍵點如能把握好，可以顯著高產蟬花蟲草與紅曲霉固體共發酵培養物功效成分的含量。

本發明操作簡便，效果良好，可應用到大規模蟬花蟲草與紅曲霉固體共發酵的實際生產過程中。

具體實施方式

以下實施例用于說明本發明，但不是對本發明的限制。

實施例1：不同碳源對蟬花蟲草與紅曲霉固體共發酵產功效成分的效果

(1)菌種制備：將菌株CCIC-3-1和MRUB-5分別接種到PDA斜面培養基，于28℃恒溫培養10d，用無菌水洗下孢子，稀釋調整使孢子終濃度達到5×10⁷個/毫升；