[發明專利]食蟹猴急性肝衰模型的建立方法

無效

• 申請號: 201010226472.0
• 申請日: 2010-07-14
• 公開（公告）號: CN101869091A
• 公開（公告）日: 2010-10-27
• 發明（設計）人: 簡國登;潘明新;高毅;張志;高森;周煥城
• 申請（專利權）人: 南方醫科大學珠江醫院
• 主分類號: A01K67/027
• 分類號: A01K67/027
• 代理公司: 北京市立方律師事務所 11330
• 代理人: 閔磊

技術領域

本發明涉及急性肝衰動物模型的建立方法，具體涉及利用食蟹猴建立急性肝衰模型的方法。

背景技術

急性肝功能衰竭(acute?liver?failure，ALF)是指原來不存在肝硬化的患者26周內出現凝血異常和不同程度的意識改變，其病程短、預后極差，有報道顯示病死率高達80％。目前，唯一有效的治療方法是原位肝移植。然而，目前因為器官短缺，有三分之一的急性肝衰患者在等待器官移植的過程中死亡。作為急性肝功能衰竭患者肝移植或肝再生的橋梁，人工肝支持系統是非常必要的。

人工肝支持系統已被國內外學者證明具有良好的臨床治療效果。人工肝支持系統可以分為非生物人工肝支持系統和生物人工肝支持系統，其中最有發展前景的是生物人工肝支持系統。生物人工肝是利用培養的生物活性成分(肝細胞)置于體外生物反應器中，患者血液/血漿流過生物反應器，通過半透膜或直接接觸與培養肝細胞進行物質交換，為肝功能衰竭患者提供肝臟支持功能。在生物人工肝的研究中，為評價生物人工肝的安全性和有效性，穩定的急性肝功能衰竭模型的建立是必不可少的。

然而，目前沒有一種已建立的動物模型能夠適應這種要求。因此，有必要提供一種急性肝衰動物模型，以滿足科學研究的需求。

發明內容

本發明的目的在于提出一種食蟹猴急性肝衰模型的建立方法，所述方法包括經食蟹猴頸外靜脈注射D-氨基半乳糖的步驟。

在本發明的實施方式中，所述D-氨基半乳糖為0.1g/ml的D-氨基半乳糖的葡萄糖溶液的形式。在優選的實施方式中，所述D-氨基半乳糖的葡萄糖溶液的pH為6.8。

在本發明的另一實施方式中，所述D-氨基半乳糖的葡萄糖溶液在10分鐘內被注射完畢。

在本發明的另一實施方式中，所述D-氨基半乳糖以0.3g/kg體重的劑量被注射進入食蟹猴。

在本發明的另一實施方式中，在注射之前，在頸外側中段且與頸外靜脈垂直處作2～3cm的橫切口，切開皮膚皮下組織，結扎出血點，并用彎血管鉗沿靜脈方向分離皮膚組織，將靜脈游離1.5～2cm。

由D-氨基半乳糖導致大量肝細胞壞死所誘導的急性肝功能衰竭過程被認為是最接近人的急性肝衰竭病程。本發明提供的食蟹猴急性肝衰模型的建立方法，是通過食蟹猴頸外靜脈注射D-氨基半乳糖溶液，以導致大量肝細胞壞死，建立食蟹猴急性肝衰模型。根據該模型，對不同的食蟹猴進行分析對比，實際試驗結果表明，通過頸外靜脈注射D-氨基半乳糖溶液后，食蟹猴出現了一些與肝功能下降相關的臨床表現，如食欲下降、活動減少、惡心嘔吐、嗜睡以及昏迷，最終死于肝功能衰竭，生化檢測、死亡后的尸體解剖及光鏡、電鏡病理學改變也證實了這一實驗結果，從而說明本發明以實驗手段建立了食蟹猴急性肝衰模型，該模型能夠很好地用于生物人工肝系統的安全性和有效性的臨床前評價。

附圖說明

圖1-3分別為本發明實施例1中食蟹猴的肝臟、腎臟和腦部切片在光鏡下觀察到的圖片；

圖4-6分別為本發明實施例1中食蟹猴的肝臟、腎臟和腦部切片在電鏡下觀察到的圖片；

圖7-9分別為本發明實施例2中食蟹猴的肝臟、腎臟和腦部切片在光鏡下觀察到的圖片；

圖10-12分別為本發明實施例2中食蟹猴的肝臟、腎臟和腦部切片在電鏡下觀察到的圖片。

具體實施方式

以下將結合具體實驗來闡述本發明的具體實施方法以及本發明的優點。

研究表明，D-氨基半乳糖是一種肝細胞毒性藥物，可在短時間內引起嚴重肝損害，其作用機制是：①通過抑制肝細胞的RNA和漿膜蛋白合成造成肝細胞壞死；②肝細胞壞死與細胞外Ca?²⁺大量進入細胞內有關；③腸外因素，包括胃腸通透性增加，細菌的移位和內毒素等都增加了D-氨基半乳糖的肝臟毒性。

大動物模型是醫療新產品開發的必需資料。在生物人工肝進行大動物肝功能衰竭的實驗治療過程中，大動物的血漿將與人的肝細胞直接接觸，這可能誘發動物抗人的免疫反應；考慮到降低免疫因素的需要，本發明采用靈長類食蟹猴為模型動物。靈長類動物是目前最理想的臨床前實驗數據來源，在形態結構、組織結構、免疫、生理和代謝等方面與人類高度近似的優點，但開展并不廣泛，數據資料比較稀缺。食蟹猴肝功能衰竭模型的建立目前尚未有成熟的方法，也尚未有利用生物人工肝進行救治的研究報道。從臨床表現、血液生化指標、組織學改變等各個生理病理方面模擬人類的急性肝功能衰竭過程，將有利于我們探討生物人工肝治療急性肝衰竭的方法，有利于評價生物人工肝的安全性和有效性，這不僅有重要的理論價值，也有著潛在的應用前景。