[發明專利]利用寡核苷酸和氧化石墨烯檢測汞離子的熒光檢測方法

無效

• 申請號: 201010223065.4
• 申請日: 2010-07-09
• 公開（公告）號: CN101887020A
• 公開（公告）日: 2010-11-17
• 發明（設計）人: 黃維;劉興奮;苗麗坤;范曲立
• 申請（專利權）人: 南京郵電大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 葉連生

1.一種利用寡核苷酸和氧化石墨烯檢測汞離子的熒光檢測方法，其特征在于該方法包括以下步驟：

a.將染料標記的寡核苷酸熒光探針加入到緩沖溶液中，以480nm為激發波長，進行熒光檢測，記錄該探針的熒光發射譜帶；

b.將氧化石墨烯加入到上述溶液中，氧化石墨烯作為固相載體吸附自由卷曲狀態的寡核苷酸探針，形成寡核苷酸/石墨烯復合物，此時染料的熒光被氧化石墨烯猝滅；

c.在寡核苷酸/石墨烯復合物中加入含汞離子的待檢測物質進行反應；

d.通過汞離子與胸腺嘧啶堿基之間的特異性作用，形成由胸腺嘧啶-汞離子-胸腺嘧啶連接構成的莖-環結構，從而使結合汞離子的寡核苷酸探針脫離氧化石墨烯的表面，染料的熒光信號得以恢復；根據熒光信號恢復的程度實現對汞離子的定性及定量檢測。

2.根據權利要求1所述的利用寡核苷酸和氧化石墨烯檢測汞離子的熒光檢測方法，其特征是步驟a)所述的將染料標記的寡核苷酸熒光探針加入到緩沖溶液中，用熒光分光光度計進行檢測，所用染料為熒光素(FAM)；染料標記在寡核苷酸探針的5’端；寡核苷酸熒光探針的堿基組成為：5’-FAM-CATTTCTTTCTTCCCCTTGTTTGTTTCA-3’；所用緩沖溶液為20mM?Tris-HCl，100mM?NaCl，5mM?KCl，5mM?MgCl₂?pH＝7.4；所用的熒光檢測方法為，將一定量的探針溶液加入到1.6mL緩沖溶液中即可進行熒光檢測，激發波長為480nm，掃描范圍為490-650nm。

3.根據權利要求1所述的利用寡核苷酸和氧化石墨烯檢測汞離子的熒光檢測方法，其特征是步驟b)所述的寡核苷酸/石墨烯復合物的形成，是通過非共價鍵相互作用使寡核苷酸探針吸附到氧化石墨烯表面。

4.根據權利要求3所述的利用寡核苷酸和氧化石墨烯檢測汞離子的熒光檢測方法，其特征是將氧化石墨烯加入到含有寡核苷酸探針的緩沖溶液中后，室溫放置5分鐘，然后進行熒光檢測，激發波長為480nm，掃描范圍為490-650nm。

5.根據權利要求1所述的利用寡核苷酸和氧化石墨烯檢測汞離子的熒光檢測方法，其特征是步驟c)所述的加入汞離子進行反應，所用的汞離子母液為用0.5％HNO₃進行溶解的Hg(NO₃)₂溶液，或是Hg(CH₃COO)₂、HgCl₂、Hg(ClO₄)₂等汞離子鹽的溶液。

6.根據權利要求1所述的利用寡核苷酸和氧化石墨烯檢測汞離子的熒光檢測方法，其特征是加入汞離子溶液后熒光信號恢復所用的時間為室溫，35～45分鐘。

7.根據權利要求1所述的利用寡核苷酸和氧化石墨烯檢測汞離子的熒光檢測方法，其特征是所述的熒光信號用島津RF-5301熒光分光光度計進行檢測，激發波長為480nm，發射波長掃描范圍為490-650nm。

8.根據權利要求1所述的利用寡核苷酸和氧化石墨烯檢測汞離子的熒光檢測方法，其特征是所述的寡核苷酸熒光探針為一段富含胸腺嘧啶堿基的單鏈寡核苷酸，染料標記在5’端，或3’端，該探針能與汞離子進行特異性結合形成由胸腺嘧啶-汞離子-胸腺嘧啶連接構成的莖-環結構。

9.根據權利要求1所述的利用寡核苷酸和氧化石墨烯檢測汞離子的熒光檢測方法，其特征是所述的染料標記是熒光素或異硫氰酸熒光素。