[發明專利]用兩性離子化合物提高核酸雜交特異性的方法

有效

• 申請號: 201010222366.5
• 申請日: 2006-12-20
• 公開（公告）號: CN101886131A
• 公開（公告）日: 2010-11-17
• 發明（設計）人: 李貞男;白象鉉
• 申請（專利權）人: 三星電子株式會社
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12P19/34
• 代理公司: 北京市柳沈律師事務所 11105
• 代理人: 金擬粲

本申請是中國申請200610168642.8的分案申請，該母案的申請日為2006年12月20日，本分案采用了與該母案一致的發明名稱。

技術領域

本發明涉及用特定的兩性離子化合物提高核酸雜交特異性的方法。

背景技術

雜交特異性(也稱為雜交嚴格性)指當兩條互補核酸和非互補核酸進行雜交時，互補核酸相互形成特異性雜合體的程度。總的來說，已試圖通過調整緩沖液中的鹽濃度和反應溫度，或者通過加入添加劑如Denhart溶液，或添加非特異性DNA或RNA以誘導雜交競爭來獲得更高的雜交特異性。

聚合酶鏈式反應(PCR)是擴增核酸的方法，包括核酸的變性、退火和延伸，在退火進程期間，發生探針與目標核酸的雜交。可以根據探針與目標核酸之間的同源程度更改PCR的條件。當在給定PCR條件下提高退火溫度時，非特異性雜交產物的產率下降，然而，當降低退火溫度時，非特異性雜交產物的產率增加。

雜交特異性對聚合酶鏈式反應(尤其是對多重PCR)有不利影響。多重PCR使待擴增的不同基因能夠在同一反應中同時擴增。也就是說，將能夠擴增各自的目標序列的不同引物組放在一個反應器中，目標序列的擴增在單個PCR中同時進行。用于多重PCR的引物應當只對目標DNA序列是特異性的，并且不應干擾其它引物的反應，這樣目標DNAs可以充分地擴增。多重PCR產生許多目標雜交產物，它們由許多的電泳條帶所顯示。因此，如果退火過程中雜交特異性低，那么除了許多目標條帶之外，在電泳凝膠上還會出現許多的條帶，在多重PCR結果分析中帶來問題。因此，強烈需要提高雜交特異性。

美國專利4,936,963公開了是使用兩性離子物質組氨酸減少電泳所用時間以降低電泳中總傳導率的方法。該發明利用兩性離子物質，本發明也利用兩性離子物質。然而，其使用兩性離子物質的目的是減少電泳所用時間，不同于本發明的目的，本發明的目的是提高核酸雜交特異性。

出于這種考慮，本發明的發明人進行了研究，目的是解決相關領域現有技術所暴露出來的問題，發現核酸雜交特異性的提高可以通過向核酸雜交反應體系尤其是多重PCR中添加特定的兩性離子化合物來誘導。

發明內容

本發明提供通過在含特定兩性離子化合物的溶液中雜交核酸來提高核酸雜交特異性的方法。

根據本發明的一個方面，提供了提高核酸雜交特異性的方法，該方法包括在含兩性離子化合物的溶液中雜交核酸，所述兩性離子化合物選自3-(環己基氨基)-1-丙磺酸(CAPS)、3-[(3-膽酰胺基丙基)二甲基銨基]-1-丙磺酸鹽(3-[(3-cholamidopropyl)dimethyl-ammonio]-1-propane?sulfonate)(CHAPS)、3-(環己基氨基)-2-羥基-1-丙磺酸鹽(CAPSO)、和2-(環己基氨基)乙磺酸鹽(CHES)。

根據本發明的另一個方面，提供了擴增目標核酸的方法，該方法包括在含兩性離子化合物的溶液中雜交引物和目標核酸，所述兩性離子化合物選自3-(環己基氨基)-1-丙磺酸(CAPS)、3-[(3-膽酰胺基丙基)二甲基銨基]-1-丙磺酸鹽(CHAPS)、3-(環己基氨基)-2-羥基-1-丙磺酸鹽(CAPSO)、和2-(環己基氨基)乙磺酸鹽(CHES)。

根據本發明的另一個方面，提供了用于核酸雜交的包含兩性離子化合物的溶液，所述兩性離子化合物選自3-(環己基氨基)-1-丙磺酸(CAPS)、3-[(3-膽酰胺基丙基)二甲基銨基]-1-丙磺酸鹽(CHAPS)、3-(環己基氨基)-2-羥基-1-丙磺酸鹽(CAPSO)、和2-(環己基氨基)乙磺酸鹽(CHES)。

根據本發明的另一個方面，提供了包含用于核酸雜交的溶液的核酸雜交試劑盒，所述溶液包含兩性離子化合物，所述兩性離子化合物選自3-(環己基氨基)-1-丙磺酸(CAPS)、3-[(3-膽酰胺基丙基)二甲基銨基]-1-丙磺酸鹽(CHAPS)、3-(環己基氨基)-2-羥基-1-丙磺酸鹽(CAPSO)、和2-(環己基氨基)乙磺酸鹽(CHES)。

更具體地，本發明涉及：

1.提高核酸雜交特異性的方法，所述方法包括：

在含有選自以下的兩性離子化合物的溶液中雜交核酸：3-(環己基氨基)-1-丙磺酸(CAPS)、3-[(3-膽酰胺基丙基)二甲基銨基]-1-丙磺酸鹽(CHAPS)、3-(環己基氨基)-2-羥基-1-丙磺酸鹽(CAPSO)和2-(環己基氨基)乙磺酸鹽(CHES)。

2.項1的方法，其中所述兩性離子化合物的濃度以重量計為0.2至3％。