[發(fā)明專利]猴副流感病毒5型的RT-PCR檢測方法及試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010221415.3
• 申請日: 2010-06-29
• 公開（公告）號: CN101880732A
• 公開（公告）日: 2010-11-10
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 賀爭鳴;馮育芳;李曉波
• 申請（專利權(quán)）人: 中國藥品生物制品檢定所
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 北京尚誠知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11322
• 代理人: 魯兵

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域中病毒的檢測方法，特別是涉及猴副流感病毒5型(SV5)的RT-PCR檢測方法及試劑盒。

背景技術(shù)

猴副流感病毒5型(Simian?parainfluenza?virus?5，SV5)是1956年首次由Hull等人從猴腎細胞培養(yǎng)物中分離得到，隨后在人、犬等動物體內(nèi)也相繼分離到該病毒，在分類上SV5屬于副粘病毒科，副粘病毒屬，同屬的其它成員包括人副流感病毒1-4型、腮腺炎病毒、新城疫病毒、仙臺病毒等。

SV5在猴群中常以隱性感染的方式存在，多無臨床癥狀，另外在豚鼠、地鼠、犬、母牛、山羊和綿羊血清中也含有高低度的SV5病毒抗體，在豚鼠中抗體陽性率達到20％，在地鼠群中抗體陽性率達到43％，表明存在SV5病毒或相關(guān)病毒的感染。SV5廣泛存在于亞洲和非洲的猴群中，尤以恒河猴最為常見。在馬來西亞和柬埔寨等國家的猴群中，SV5的分離率高達30-33％，抗體陽性率高達70-80％。目前我國尚未見猴感染SV5的報道，SV5也可以感染人，但未見有臨床癥狀報道。對于SV5在其它動物群中的發(fā)生情況尚不清楚。

SV5核酸型為單股RNA，病毒粒子呈圓形，直徑150-250nm，內(nèi)含呈螺旋型對稱的核蛋白，直徑15-18nm，外圍以脂蛋白囊膜，囊膜上含有纖突，為病毒的血凝素和神經(jīng)氨酸酶部分。SV5可在猴、人、狒狒、牛、犬、倉鼠和豚鼠等多種動物的原代腎細胞以及BHK-21，Vero等細胞上增殖，其中以原代猴腎細胞最為易感，并可產(chǎn)生嗜酸性胞漿內(nèi)包涵體。SV5引起的細胞病變多為形成多個核聚集在一起的多核核包體細胞，并呈環(huán)形空泡，有些細胞呈梭形。

SV5與人副流感病毒1-4型均有抗原交叉反應(yīng)，與SV-41、腮腺炎病毒(mumps)、麻疹病毒(measles)也有交叉反應(yīng)。病毒可存在于猴的組織器官中(尤其是腎臟)，因此常常造成猴源細胞培養(yǎng)物的污染。用SV5經(jīng)鼻腔人工感染恒河猴，3d后即可從咽拭子中發(fā)現(xiàn)病毒，7d后從肺及氣管中也可分離到病毒，但感染后無任何癥狀表現(xiàn)。實驗條件下感染豚鼠不能引起明顯的疾病，但可刺激機體產(chǎn)生抗體。經(jīng)鼻內(nèi)感染倉鼠非常易感，可以產(chǎn)生腦炎等癥狀。

SV5是單鏈、負義的不分節(jié)段的RNA病毒，它區(qū)別于其它副粘病毒家族病毒的一個重要特征就是其有一套最小的病毒基因組，全長15246nt，由3′端引導序列(55nt)和5′末端序列(31nt)以及七段連續(xù)性的基因組成。它們分別是：L基因(6804nt，編碼聚合酶蛋白large?polymerase?protein)，HN基因(1789nt，編碼血凝-神經(jīng)氨酸酶hemagglutinin-neuraminidase)，SH基因(292nt，編碼小疏水性蛋白smallhydrophobic?protein)，F(xiàn)基因(1873nt，編碼融合蛋白fusion?protein)，M基因(1371nt，編碼膜基質(zhì)蛋白，matrix?protein)，P基因(1298nt，編碼磷酸化蛋白，phosphoprotein)，NP基因(1725nt，編碼病毒核衣殼蛋白neucleocapsid?protein)。其中P基因3′端有一小段基因又可編碼V蛋白，這一小段基因又稱為V基因(669nt)。V蛋白(222個殘基)和P蛋白(392個殘基)N末端164個氨基酸殘基相同，但C末端不同。SV5在基因組結(jié)構(gòu)上和仙臺病毒(SeV)、口炎病毒(VSV)等病毒一個重要的區(qū)別就是：SV5基因組各個基因間結(jié)合部是具有高度可變性的，而SeV、VSV等病毒則相當保守。最近研究表明，SV5各個基因間結(jié)合部在調(diào)控聚合酶功能和衰減方面是有差別的。