[發(fā)明專利]含有GLP-1或其類似物的融合蛋白、制備方法及其應(yīng)用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010220567.1
• 申請日: 2010-07-08
• 公開（公告）號: CN102311501A
• 公開（公告）日: 2012-01-11
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 龔珉;徐為人;鄭學(xué)敏;任曉文;湯立達(dá);王玉麗;劉巍;孟凡翠
• 申請（專利權(quán)）人: 天津藥物研究院
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N15/63;C12N1/15;C12N1/19;C12N1/21;C12N5/10;A61K38/22;A61K47/48;A61K48/00;A61K9/10;A61K9/19;A61P3/04;A6
• 代理公司: 北京泛華偉業(yè)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11280
• 代理人: 曹津燕

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于與糖尿病相關(guān)的藥物領(lǐng)域。具體而言，本發(fā)明涉及一種具有延長的胰高血糖素樣肽類的體內(nèi)半衰期的融合蛋白。本發(fā)明還涉及該融合蛋白的制備方法以及其在制備糖尿病藥物中的應(yīng)用。?

背景技術(shù)

本發(fā)明涉及的胰高血糖素樣肽1(glucagon-likepeptide-1，以下簡稱：GLP-1)主要是由小腸L細(xì)胞分泌的一種由37個氨基酸組成的多肽，其活性形式為GLP-1(7-37)OH和GLP-1(7-36)NH₂(Mojsov?S，J?Clin?Invest.1987Feb；79(2)：616-9)。GLP-1能夠明顯降低人用餐后的血糖，刺激胰島素的產(chǎn)生，同時還能起到一定的減肥效應(yīng)，并且不會引起低血糖癥(Drucker?D?J，Diabetes.1998?Feb；47(2)：159-69)。近期的研究還表明GLP-1對胰腺具有再生作用(Drucker?D?J，2003?Dec；144(12)：5145-8)。然而，GLP-1(7-37)的血清半衰期僅僅為3-5分鐘。在GLP-1肽的治療用途方面，來自蜥蜴唾液的人GLP-1類似物Exendin-4的合成物Exenatide已于2005年在美國作為降糖藥上市，這種合成物在血中的半衰期為2.5小時左右，每天需要在早飯及晚飯前注射給藥，導(dǎo)致在臨床使用中每天多次注射給藥非常不便。因此，延長GLP-1類似物的體內(nèi)時間對于臨床應(yīng)用具有重要的意義。?

目前已經(jīng)有不少研究采用GLP-1類似物融合蛋白技術(shù)解決GLP-1類似物在體內(nèi)的存留時間短的問題(例如中國專利申請CN90101167.3、CN200710018734.2、CN200410054397.9、CN01820232.2、CN200380110152.7、CN200510039265.3、CN200610127237.1和CN200910009642.7)。然而，現(xiàn)有技術(shù)與臨床上的理想目標(biāo)還有很大距離。?

發(fā)明內(nèi)容

針對現(xiàn)有技術(shù)存在的不足，本發(fā)明采用融合蛋白技術(shù)克服了GLP-1半衰期短的問題。本發(fā)明的一個目的是提供一種融合蛋白，該融合蛋白具有GLP-1或其類似物的活性，并且在體內(nèi)的存留時間長，從而克服現(xiàn)有技術(shù)中GLP-1類似物藥物需要每天多次注射給藥的缺陷。本發(fā)明的另一目的是提供編碼該融合蛋白的核酸序列、包含該核酸序列的載體以及包含該載體?的宿主細(xì)胞。本發(fā)明的再一個目的是提供制備該融合蛋白的方法。本發(fā)明的又一個目的是提供該融合蛋白的應(yīng)用，包括其在制備治療糖尿病和/或肥胖癥藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明的又一個目的是提供包含該融合蛋白的藥物組合物。?

用于實(shí)現(xiàn)上述目的的技術(shù)方案如下：?

一方面，本發(fā)明提供一種融合蛋白，融合蛋白由以下通式I表示：?

A-a-B-a’-A’?

(I)?

其中，?

A、A’獨(dú)立地為氨基酸序列為SEQ?ID?NO?53的多肽1或氨基酸序列為SEQ?ID?NO?54的多肽2；?

B為氨基酸序列為SEQ?ID?NO?55的多肽3或氨基酸序列為SEQ?ID?NO56的多肽4；?

a、a’獨(dú)立地為由0-5個氨基酸殘基，例如0-3個氨基酸殘基組成的連接肽。?

在上述融合蛋白中，組成所述連接肽的氨基酸可以選自甘氨酸、丙氨酸、異亮氨酸和纈氨酸；優(yōu)選為甘氨酸。優(yōu)選地，所述A和A’中之一以N-末端與連接肽相連，另一個以C-末端與連接肽相連。?

具體而言，所述融合蛋白的結(jié)構(gòu)如下：?

NH₂-多肽1-GLY-多肽3-GLY-多肽1-COOH；?

NH₂-多肽1-GLY-多肽4-GLY-多肽1-COOH；?

NH₂-多肽1-多肽3-GLY-多肽1-COOH；?

NH₂-多肽1-多肽4-GLY-多肽1-COOH；?

NH₂-多肽1-多肽4-多肽1-COOH；?

NH₂-多肽1-多肽3-多肽1-COOH；?

NH₂-多肽1-GLY-多肽3-GLY-多肽2-COOH；?

NH₂-多肽1-GLY-多肽4-GLY-多肽2-COOH；?

NH₂-多肽1-多肽3-GLY-多肽2-COOH；?

NH₂-多肽1-多肽4-GLY-多肽2-COOH；?