[發明專利]一種B血型抗原表位模擬肽及其應用

有效

• 申請號: 201010219416.4
• 申請日: 2010-07-07
• 公開（公告）號: CN101899097A
• 公開（公告）日: 2010-12-01
• 發明（設計）人: 張積仁;岑東芝;李許鋒;羅敏;鄒建軍
• 申請（專利權）人: 南方醫科大學
• 主分類號: C07K7/08
• 分類號: C07K7/08;C12N15/62;A61K48/00;A61P35/00
• 代理公司: 廣州市天河廬陽專利事務所 44244
• 代理人: 胡濟元

技術領域

本發明涉及生物化學領域，具體涉及短肽，特別是抗原表位模擬肽。

背景技術

人類致力于腫瘤免疫的研究經歷了100多年的歷史，形成了完整的理論體系，并建立了包括非特異性免疫治療、腫瘤疫苗、過繼性細胞免疫治療、細胞因子免疫治療等一系列的免疫療法。腫瘤免疫治療的基本思路是通過相關技術方法調動宿主的免疫系統的抗腫瘤免疫應答能力，消滅已經形成的腫瘤細胞或抑制其進一步發展。多數免疫治療方法能夠增強患者全身的免疫功能，但抗腫瘤效果卻與預期的相差很多。主要原因是腫瘤患者免疫功能狀態并不能直接反應機體抗腫瘤免疫效應，即使患者全身的免疫功能得到改善，但腫瘤微環境內的免疫效應卻是仍處于抑制狀態，導致治療效果不理想。臨床器官移植后，由于受者體內預先存在有抗供者組織抗原的抗體，它們可與供者組織相結合，通過激活補體而直接破壞靶細胞，或通過補體激活所產生的活性片段引起血管通透性增高和中性粒細胞浸潤，導致毛細血管和小血管內皮細胞損傷、纖維蛋白沉積和大量血小板聚集，并形成血栓，從而使移植器官發生不可逆性缺血、變性、壞死，導致超急性排斥反應的發生。已有研究利用血型A單克隆抗體篩選噬菌體隨機十二肽庫得到的模擬多肽與GST蛋白進行N端融合后能夠特異性結合抗A抗體，具有天然血型A抗原的抗原性，將其用于ABO不相容性移植前受者體內血漿中的血型特異性抗體濾除。基于這種臨床現象，假設將具有相應抗原的紅細胞膜引入體內存在相應抗體的腫瘤患者的腫瘤組織內部，這樣就有可能在腫瘤內部發生這樣的反應，繼而引起腫瘤內部非特異性及特異性抗腫瘤免疫反應，從總體上改變腫瘤內部免疫抑制狀態，達到治療腫瘤的目的。

在紅細胞表面的ABO血型抗原是糖脂，是異種移植發生超急性排斥反應的最主要靶抗原，人體內存在針對該抗原的天然抗體，異種移植后預先存在體內的天然抗體與移植器官血管內皮細胞表面的抗原結合，激活補體，最終導致移植器官的壞死。基于上述理論，將人體內這種天然存在的抗體應用到腫瘤的免疫治療中，利用這種預先存在人體內的天然抗體，制備與體內存在天然抗體相應的血型抗原，直接腫瘤內注射，體內預先存在的天然抗體可導致抗原抗體反應發生，并激活補體，從而導致腫瘤細胞的壞死。但B血型糖抗原的合成技術復雜，純化困難且成本高；另外多糖成分性質不夠穩定，不易于進行修飾等操作。

發明內容

本發明要解決的技術問題是提供一種B血型抗原表位模擬肽。

本發明解決上述問題的技術方案是：

一種B血型抗原表位模擬肽，該模擬肽的氨基酸序列為：His-Ser-Leu-Lys-His-Thr-Gln-Met-Ser-Tyr-Ser-Ser。(SEQ?NO.1)。

本發明所述的B血型抗原表位模擬肽可通過化學合成的方法得到，如多肽固相合成法；也可通過基因工程的方法得到，例如：將編碼所述模擬肽的DNA序列克隆到原核/真核表達載體中進行表達，然后用常規方法分離純化目的多肽按即可。上述方法均是本領域的常規技術，這里不再詳述。

本發明所述B血型抗原表位模擬肽可以模擬B血型的糖抗原表位，代替B血型糖抗原用于治療腫瘤。

但是本發明模擬肽缺乏跨膜區及胞內段，不易定位于細胞膜表面表達。因此，最好利用編碼所述模擬肽的基因代替人Fas基因胞外段形成融合基因SEQ?NO.2?DNA疫苗。瘤內局部注射所述DNA疫苗后，能夠被腫瘤細胞攝取，并表達模擬肽/Fas融合基因，使本發明模擬肽錨定于腫瘤細胞表面的，與補體及天然存在的抗體結合發揮CDC及ADCC作用殺死腫瘤細胞。

本發明所述的抗腫瘤DNA疫苗是重組pIRES質粒，其外源基因包括SEQ?NO.2所示的融合基因。

所述DNA疫苗可通過將SEQ?NO.2所示的融合基因插入到pIRES質粒的多克隆位點構建得到。

為了進一步提高本發明所述DNA疫苗的抗腫瘤活性，可在所述重組pIRES質粒的另一多克隆位點插入Mip3β基因。Mip3β基因的表達產物具有強大的趨化作用，結合融合蛋白中Fas胞內段三聚化發生促腫瘤細胞凋亡作用，使腫瘤內部微環境的免疫抑制狀態逆轉而發揮抗腫瘤作用。

附圖說明

圖1是重組pIRES質粒的雙酶切鑒定圖，其中，1為DNAMAKER，2～6依次為M-pIRES、P/F-pIRES、P/F-M-pIRES和pIRES的雙酶切產物。

圖2是轉染后細胞mRNA表達的RT-PCR鑒定圖，其中，1為DNAMAKER，2～6依次為P/F-pIRES、M-pIRES、P/F-M-pIRES和pIRES的RT-PCR產物。